一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：HEP3B-FLUC-eGFP-puro 人肝癌细胞 (FLUC/eGFP 双标)(STR 鉴定正确)
细胞别称：Hep3B2.1-7-LUC-EGFP；HEP3B-LUC-EGFP；人肝癌细胞 – 荧光素酶标记 – EGFP；HEP3B – 荧光素酶标记 – EGFP
种属来源：人
年龄性别：男，7 岁（背景介绍提及细胞系源自 8 岁黑人男性，以实际溯源信息为准）
组织来源：肝脏
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞代数：10 代以内（低传代范围，可更好维持 FLUC/eGFP 双荧光标记稳定性及肝癌细胞含乙型肝炎病毒基因组的特性）
生物安全等级：2 级（因含乙型肝炎病毒基因组，需在 2 级生物安全防护下操作）
背景与筛选验证
背景介绍
HEP3B-FLUC-eGFP-puro 细胞稳定共表达萤火虫荧光素酶（FLUC）与增强型绿色荧光蛋白（eGFP），性状稳定，可用作双荧光活性检测的阳性对照，也适用于人肝癌体内成像实验（如裸鼠成瘤、转移模型的双荧光追踪）。
该细胞通过慢病毒转染携带 Luc 基因，亲本 Hep3B2.1-7 细胞具备明确特征：源自黑人男性肝癌组织，染色体模式数目为 60，在裸鼠中能致瘤；核心特性为含有乙型肝炎病毒基因组，是研究乙型肝炎病毒相关肝癌发病机制、药物筛选的专用细胞株。
puro 药筛浓度
HEP3B2.1-7-LUC-EGFP 细胞 puro（嘌呤霉素）药筛浓度为 1.0μg/ml，用于去除未转染细胞；培养过程中建议使用 0.5μg/ml 浓度 puro 维持。低浓度维持可保障双荧光基因稳定表达，同时不影响细胞贴壁生长、致瘤性及乙型肝炎病毒基因组相关特性。
细胞培养核心信息
基础参数
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装；
- 支原体检测：无（无支原体污染，避免干扰细胞增殖、双荧光表达及肝癌相关实验结果，保障数据准确性）；
- 保藏机构：ATCC; HB-8064、BCRC; 60434、BCRJ; 0357、DSMZ; ACC-93、ECACC; 86062703（细胞来源可追溯，确保细胞株稳定性、致瘤性及乙型肝炎病毒基因组特性可靠）。
培养与冻存
- 培养基：DMEM 培养基 + 10% FBS（胎牛血清）+PS（青霉素 – 链霉素双抗）+1.0μg/ml puro（仅药筛阶段按此浓度添加，常规培养建议用 0.5μg/ml puro 维持，适配贴壁生长的肝癌细胞营养需求）；
- 培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃；需严格遵循 2 级生物安全防护规范操作（如在生物安全柜内进行换液、传代，避免病毒扩散）；避免强光直射，减少 eGFP 光漂白，保障双荧光观测效果；
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存；冻存前需在 2 级生物安全防护下操作，确保细胞处于对数生长期，保留双荧光特性、致瘤性及乙型肝炎病毒基因组；可适当提高冻存密度，减少复苏损伤，复苏后优先观察细胞贴壁状态与双荧光表达。
货期与运输
- 细胞货期：现货，1 周左右；
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；运输过程需标注 “生物安全等级 2 级样本”，接收后立即在 2 级生物安全防护环境下处理。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；因含乙型肝炎病毒基因组，所有操作必须严格遵守 2 级生物安全防护规定，避免实验人员暴露及病毒污染。
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