一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代操作

• 观察细胞密度，当密度达 2×10⁶-4×10⁶cells/mL（细胞悬浮均匀，无大量沉底或聚团）时，直接按 1:2-1:3 比例加入新鲜专用培养基稀释传代。
• 无需胰酶消化，用移液器轻柔吹打细胞悬液 3-5 次，确保细胞分散成单细胞悬液；避免用力过猛破坏细胞形态，影响后续实验活性。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次培养基，将细胞悬液转移至离心管，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清（若需收集细胞分泌物，可保留上清备用）。
• 用新鲜专用培养基重悬细胞沉淀，调整密度至 1×10⁶cells/mL 左右后放回培养瓶；若发现少量聚团，可通过轻柔吹打分散，防止聚团导致营养吸收不均。

3. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、悬浮分散均一、活率≥90%）的细胞悬液，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装到冻存管后，按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对白血病细胞的损伤，保留其生物学特性。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化，避免冰晶反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的专用培养基重悬细胞后接种，24-48h 观察细胞存活状态及悬浮能力恢复；复苏后建议培养 1 代再进行实验，确保细胞活性稳定。