一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间约 69h，表达 CK7、CK19、E – 钙黏蛋白等标志物，Ki-67 阳性提示增殖活性
• 致瘤性：NXG 小鼠皮下移植成瘤率 100%，移植后 4 周肝肺无转移灶
• 核型特征：复杂核型，以四倍体为主（超二倍体 39%、超四倍体 44%、亚七倍体 17%），典型核型为 93，XXXX der (5) der (7) der (9)
• 药物抗性：对吉西他滨、紫杉醇、5 – 氟尿嘧啶、奥沙利铂呈多药耐药性（具体 IC50 值见药物敏感性试验）

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（需严格按配方配制，保障细胞耐药性与增殖特性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作

• 当细胞密度达 70%-80%（上皮样细胞铺满瓶壁，多核 / 巨核细胞形态清晰，无明显堆叠）时，弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免损伤多核细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、间隙增大（约 3-4 分钟，因细胞大小差异大，需逐瓶观察，避免过度消化导致巨核细胞破裂）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少多核细胞破碎），按 1:3-1:4 比例接种到新培养瓶，维持其多药耐药性与核型特性。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次新鲜培养基，换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致多核细胞脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 因种群倍增时间较长（约 69h），无需频繁换液；若发现培养基局部变黄（代谢不均），可倾斜培养瓶让新鲜培养基覆盖全瓶，避免局部营养不足。

3. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、多核 / 巨核细胞比例正常、无杂细胞）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml（确保多核细胞均匀悬浮），分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对复杂核型细胞的损伤。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏多核细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 48 小时观察贴壁情况（多核细胞贴壁较慢），72 小时后按常规换液。