一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：群体倍增时间 50 小时，免疫组化显示 CK7、CK19（上皮标志物）、E – 钙黏蛋白、波形蛋白、CA19-9 阳性，Ki-67 表达率 30%（提示中等增殖活性），无 CEA 表达
• 功能特性：悬浮培养可形成球状、囊状及孢子状 / 分枝状类器官，具备复杂腺体样结构形成能力
• 致瘤性：BALB/C 裸鼠皮下接种成瘤率 33%，肿瘤生长迅速（4 周直径达 0.7cm），肝肺无转移灶
• 核型特征：复杂核型，75% 为亚三倍体，25% 为亚四倍体，典型核型为 53、XY der (1) inv (9) der (22)
• 药物敏感性：对奥沙利铂耐药（IC50=18.86µmol/L），对 5 – 氟尿嘧啶（IC50=7.109µmol/L）、吉西他滨（IC50=0.029µmol/L）、紫杉醇（IC50=0.0046µg/mL）敏感

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞增殖、类器官形成及药物敏感性特性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点关注接触抑制丧失特性）

• 当细胞密度达 60%-70% 时立即传代（因完全无接触抑制，密度超 80% 易出现密集堆叠，影响细胞活性），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免损伤多核 / 巨核细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、多边形形态略变圆（约 2-3 分钟，因细胞增殖快，消化速度较其他 PDAC 亚型略快，需密切观察）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少巨核细胞破碎），按 1:4-1:5 比例接种到新培养瓶（扩大传代比例，控制后续增殖速度），维持其类器官形成能力与药物敏感性。

2. 换液操作

• 每 1-2 天更换 1 次新鲜培养基（因倍增时间短、代谢旺盛，需缩短换液间隔），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致多核细胞脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 若开展药物敏感性实验，换液后需稳定培养 24 小时再加药，避免换液应激影响实验结果。

3. 类器官培养操作（专项）

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官完全培养基重悬细胞至 8×10⁴cells/mL（密度低于 PDAC-X1/X2，适配其快速增殖特性）。
• 将细胞悬液接种到超低附着培养板，每孔 1mL，置于培养箱静置培养；培养第 2 天补加 500μL 新鲜类器官培养基，第 5-6 天可观察到孢子状 / 分枝状类器官，按需进行后续实验。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、多边形形态均一、多核 / 巨核细胞比例正常，密度未超 70%）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对复杂核型细胞的损伤，保留类器官形成能力。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 24 小时观察贴壁情况，48 小时后按常规换液，若需开展类器官实验，复苏后培养 1 代即可。