一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间约 48 小时，低温保存活力高且特征稳定；STR 检测无交叉污染，与来源组织相似度 91.4%（覆盖 21 个 STR 位点），不匹配公共细胞库细胞株
• 功能特性：无锚定条件下可形成结构完善的肿瘤球体（显干性特征）；基质胶中 1 周内形成胆管癌类器官；迁移能力弱于 RBE 细胞，2 周克隆形成率 7.6%（RBE 为 9.4%）
• 致瘤性：BALB/c 裸鼠接种成瘤率 100%（4 周内 3 只均成瘤），移植瘤与人体瘤免疫表型高度一致，肝肺无转移
• 核型特征：复杂亚三倍体核型，含结构性染色体畸变，典型核型为 66,XXY del (4)(p14) del (5)(p12) del (6)(q24) del (8)(p23) der (11) der (13) rob (14:21) der (21)
• 药物敏感性：对吉西他滨、紫杉醇敏感，对 5 – 氟尿嘧啶、奥沙利铂耐药

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞增殖、干性特征及药物敏感性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点应对叠层生长与无接触抑制）

• 当细胞密度达 60%-70%（短梭形 / 多角形细胞铺满瓶壁，未出现明显叠层）时立即传代（叠层后易导致底层细胞缺氧死亡），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（去除残留血清，避免影响消化）。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、间隙增大（约 2-3 分钟，上皮样细胞消化速度中等，需观察到多角形略变圆）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少叠层细胞破碎），按 1:4-1:5 比例接种到新培养瓶（控制密度防止快速叠层），维持其干性特征与药物敏感性。

2. 换液操作

• 每 1-2 天更换 1 次新鲜培养基（代谢旺盛，且叠层易导致营养不均），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致叠层脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 若发现局部出现薄叠层，需提前半天换液，补充营养并减缓叠层速度，为后续传代做准备。

3. 肿瘤球与类器官培养操作（专项）

（1）肿瘤球培养

• 收集对数期细胞，用无血清干细胞培养基洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用该培养基重悬细胞至 5×10⁴cells/mL。
• 接种到超低附着培养板，每孔 1mL，静置培养；培养第 2 天补加 500μL 无血清培养基，第 5-6 天可观察到结构完善的肿瘤球体。

（2）类器官培养

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官基础培养基重悬细胞至 3×10⁴cells/mL，与基质胶按 1:1 比例混合。
• 接种到培养板，37℃孵育 30 分钟使基质胶凝固，再加入类器官完全培养基；每 2 天更换 1 次培养基，1 周内可形成大小不等的类器官。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、短梭形 / 多角形形态均一、无叠层）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对亚三倍体细胞的损伤，保留干性特征。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 24 小时观察贴壁情况，48 小时后按常规换液，避免延误换液导致叠层。