一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间约 60 小时；STR 检测显示与原始肿瘤组织 20 个位点完全一致，无公共细胞库匹配株，无交叉污染
• 功能特性：无锚定培养基中可形成大量结构良好的肿瘤球体（显强干性特征）；接种到 Matrigel™上 1 周内快速形成肝癌类器官
• 致瘤性：BALB/c (nu/nu) 小鼠皮下无成瘤能力
• 核型特征：以亚四倍体为主（占比 93%），染色体结构畸变不明显，典型核型为 79, XXY del (1)(p31) del (2)(p22) del (5)(p13) del (8)(p12) del (10)(p12).rob (21:21)
• 药物敏感性：对索拉菲尼、5 – 氟尿嘧啶、奥沙利铂天然耐药，对紫杉醇敏感

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS+1% GlutaMAX（需严格按配方添加 GlutaMAX，保障细胞干性特征与增殖需求）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点应对叠层生长与多核细胞保护）

• 当细胞密度达 70%-80%（短梭形 / 多角形细胞铺满瓶壁，仅少量叠层）时传代（避免过度叠层），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（去除残留血清，防止影响消化效果）。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、多角形略变圆（约 3-4 分钟，细胞体积大且含多核，消化速度较慢，需耐心观察）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少多核细胞破碎），按 1:3-1:4 比例接种到新培养瓶，维持其干性特征与药物敏感性。

2. 换液操作（重点关注 GlutaMAX 补充）

• 每 2-3 天更换 1 次新鲜培养基（倍增时间较长，无需频繁换液），换液时需严格按配方配制 “1640+10% FBS+PS+1% GlutaMAX”，避免遗漏 GlutaMAX 影响细胞活性。
• 倾倒旧培养基时动作缓慢（防止叠层细胞脱落），用 PBS 冲洗 1 次后加入足量新培养基；若局部出现薄叠层，可倾斜培养瓶让培养基充分覆盖，缓解营养不均。

3. 肿瘤球与类器官培养操作（专项）

（1）肿瘤球培养

• 收集对数期细胞，用无血清干细胞培养基洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用该培养基重悬细胞至 4×10⁴cells/mL。
• 接种到超低附着培养板，每孔 1mL，静置培养；培养第 4 天补加 500μL 无血清培养基，第 7-8 天可观察到结构良好的肿瘤球体。

（2）类器官培养

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官基础培养基重悬细胞至 2×10⁴cells/mL，与 Matrigel™按 1:1 比例混合。
• 接种到培养板，37℃孵育 30 分钟使 Matrigel™凝固，再加入类器官完全培养基；每 3 天更换 1 次培养基，1 周内可形成大小不同的肝癌类器官。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、短梭形 / 多角形形态均一、多核细胞比例正常、无明显叠层）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对亚四倍体细胞的损伤。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏多核细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS+1% GlutaMAX” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 48 小时观察贴壁情况，72 小时后按常规换液。