一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间 48 小时，免疫组化显示 CK7、CK20、CKL 强阳性，Villin 阳性，CEA 灶性表达，Ki-67 表达率 50%（增殖活性高）
• 功能特性：超低吸附培养板中可高效形成类器官（从球形 / 囊状发展为孢子状、分枝状）；BALB/C 裸鼠皮下成瘤率 100%，移植瘤生长快且呈浸润性，表面有新生血管
• 核型特征：主要为亚四倍体核型，染色体数目与形态差异大，典型核型为 80、XX del (2)（q32）del (5)（p12）del (6)（q24）inv (9) del（10）p（13）del（17）p（12）
• 药物敏感性：对奥沙利铂（IC50=13.26μmol/L）、紫杉醇（IC50=0.014μmol/L）敏感，对 5 – 氟尿嘧啶（IC50=144.9μmol/L）、吉西他滨（IC50>600μmol/L）耐药
  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：无

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞增殖、类器官形成及药物敏感性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点应对聚集性生长与无接触抑制）

• 当细胞密度达 60%-70%（短梭形细胞形成稀疏团块，未出现大面积密集堆叠）时立即传代（聚集过密易导致内部细胞缺氧），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免冲散松散团块。
• 加入胰酶温和消化，待团块边缘细胞收缩、短梭形略变圆（约 2.5-3.5 分钟，聚集生长导致消化速度不均，需观察团块分散迹象）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，避免用力过猛破坏多核 / 巨核细胞），按 1:4-1:5 比例接种到新培养瓶（控制后续聚集速度），维持其类器官形成能力与药物敏感性。

2. 换液操作

• 每 1-2 天更换 1 次新鲜培养基（增殖活性高，代谢旺盛），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞团块导致脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基，确保覆盖所有细胞团块。
• 若发现局部出现小密集团块，可倾斜培养瓶让培养基充分浸润团块周围，缓解营养不均，为下次传代做准备。

3. 类器官培养操作（专项）

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官基础培养基重悬细胞至 5×10⁴cells/mL。
• 将细胞悬液接种到超低吸附培养板，每孔 1mL，置于培养箱静置培养；培养第 3 天补加 500μL 类器官完全培养基，第 7-9 天可观察到孢子状、分枝状类器官，按需进行后续实验。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、短梭形形态占比正常、多核 / 巨核细胞比例稳定、无大面积聚集）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装到冻存管后，按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对亚四倍体细胞的损伤，保留类器官形成能力。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 24 小时观察贴壁与聚集情况，48 小时后按常规换液，避免延误换液导致快速聚集。