一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间 50.72 小时；免疫组化显示 CK7、CK19（胆管细胞标志物）、AFP、Arg-1、Alb（肝细胞标志物）、CEA 阳性，GPC-3 部分表达，Ki-67 表达率 60%（增殖活性高），E – 钙黏蛋白与波形蛋白阳性（具上皮间质转化特征），CA19-9 阴性
• 功能特性：低贴壁 + 无血清条件下可形成大量完整肿瘤球体；Matrigel 凝胶中 10 天内形成肿瘤类器官
• 致瘤性：NXG 小鼠皮下接种成瘤率 67%，肝肺无转移灶
• 核型特征：复杂核型，83% 为三倍体，17% 为六倍体，染色体数目与结构异常，典型核型为 70、XXY der (4) rob（13；14）rob（15；21）
• 药物敏感性：对紫杉醇敏感（IC50=0.03107µmol/L），对奥沙利铂（IC50=9.907µmol/L）、5 – 氟尿嘧啶（IC50=123.9µmol/L）、吉西他滨（IC50=13.22µmol/L）耐药

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：无

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞双表型特征、增殖及药物敏感性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点保护多核巨细胞与双表型特征）

• 当细胞密度达 70%-80%（不规则多边形细胞均匀分布，多核巨细胞形态完整，无密集堆叠）时传代，弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免损伤多核巨细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、间隙增大（约 2.5-3.5 分钟，细胞形态多样导致消化速度不均，需观察多边形细胞略变圆）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少多核巨细胞破碎），按 1:3-1:4 比例接种到新培养瓶，维持其上皮间质转化特征与双表型分化特性。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次新鲜培养基（倍增时间较长，无需频繁换液），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致多核巨细胞脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 若开展双表型标志物检测实验，换液后需稳定培养 24 小时再处理，避免换液应激影响蛋白表达稳定性。

3. 肿瘤球与类器官培养操作（专项）

（1）肿瘤球培养

• 收集对数期细胞，用无血清培养基洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用无血清肿瘤球培养基重悬细胞至 5×10⁴cells/mL。
• 接种到超低附着培养板，每孔 1mL，静置培养；培养第 3 天补加 500μL 无血清培养基，第 7-8 天可观察到结构完整的肿瘤球体。

（2）类器官培养

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官基础培养基重悬细胞至 3×10⁴cells/mL，与 Matrigel 凝胶按 1:1 比例混合。
• 接种到培养板，37℃孵育 30 分钟使凝胶凝固，再加入类器官完全培养基；每 3 天更换 1 次培养基，10 天内可形成肿瘤类器官。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、多形态细胞比例正常、多核巨细胞数量稳定、无杂细胞）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对复杂核型细胞的损伤，保留双表型特征。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏多核巨细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 48 小时观察贴壁与细胞形态，72 小时后按常规换液。