一、细胞基本属性
- 细胞名称：Caco-2 人结直肠腺癌细胞（与 SNU-216（胃癌）、GES-1（正常胃黏膜）同属消化道来源细胞，但为结直肠腺癌（结直肠癌主要病理亚型，占比约 95%），区别于胃癌的胃腺癌 / 印戒细胞癌亚型，是结直肠癌肠上皮分化机制、药物吸收代谢研究的 “金标准” 模型；可与 GES-1（正常胃黏膜）、SNU-216（胃癌）、HGC-27（胃癌）组成 “消化道跨器官 – 正常 / 肿瘤” 对照体系，探索消化道不同器官肿瘤的共性与特异性机制，同时因肠上皮分化特性，可单独构建 “体外肠屏障模型” 用于药物研发）
- 细胞别称：CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC（别称以 “Caco” 为核心标识，大小写及连接符差异为常见书写变体，统一标注便于实验记录检索；“Caco-2/ATCC” 明确关联国际保藏机构，与 SNU-216（“SNU” 前缀）、MKN-45（“MKN” 前缀）形成消化道肿瘤细胞株的清晰区分，贴合 “结直肠癌细胞 + 系列标识” 的精准命名体系，避免与其他 “Ca” 前缀细胞（如宫颈癌细胞 CaSki）混淆）
- 种属来源：人
- 性别年龄：男；72 岁（明确的老年男性背景，填补消化道肿瘤模型中老年男性结直肠癌的空白，与 SNU-216（未明确）、MKN-45（62 岁女）形成 “老年男 – 老年女” 性别年龄对照，与 GES-1（9 个月胎儿）形成 “老年 – 胎儿” 极端年龄对照，为结直肠癌老年高发机制、老年患者药物耐受性研究提供精准模型，适合模拟临床老年男性结直肠癌研究场景）
- 组织来源：结肠（具体为原发性结肠癌组织，保留结直肠腺癌特有的 “肠上皮分化潜能、腺管样结构、结直肠特异性标志物表达” 特性；区别于胃癌的胃黏膜 / 淋巴结转移灶来源，可用于结直肠癌原发灶发病机制（如腺瘤 – 癌转化）、肠上皮分化调控研究，同时为临床结直肠癌早期诊断标志物筛选、肠屏障相关治疗提供实验依据）
- 生长特性：贴壁生长（贴壁能力稳定，对数生长期细胞增殖节奏缓慢（贴合 60-80 小时长倍增时间特性），贴壁强度高于 SNU-216（胃癌）、低于 GES-1（正常胃黏膜）；细胞生长呈 “增殖 – 分化” 两阶段：增殖期呈单层贴壁，长满后进入分化期，形成类似小肠上皮的刷状缘结构（需 14-21 天），传代需在增殖期进行（避免分化后难以消化），适合开展长周期肠上皮分化实验）
- 细胞形态：上皮细胞样（增殖期细胞呈多边形，排列规整；长满分化后呈柱状上皮形态，形成紧密连接及刷状缘（需通过电镜或免疫荧光检测刷状缘标志物如碱性磷酸酶），具备小肠上皮细胞典型形态特征；与 SNU-216（胃癌，无分化结构）、MKN-45（印戒细胞癌，粘液空泡）相比，肠上皮分化形态是核心鉴别点；与 GES-1（正常胃黏膜上皮）相比，分化后更接近小肠上皮而非胃黏膜，可通过形态观察初步判断细胞分化阶段及纯度，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞形成器官特异性区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “肠上皮分化潜能、长倍增时间、染色体异倍体特征” 核心特性，建议传代次数不超过 12 代，防止长期传代导致特性漂移，如分化能力下降（刷状缘形成减少）、倍增时间缩短、染色体数目异常）
- 背景介绍：Caco-2 细胞分离自原发性结肠癌，核心特性及应用如下：①分化特色：长满时表现出肠上皮细胞分化，是体外模拟肠屏障功能（如药物吸收、营养转运）的唯一结直肠癌细胞模型，可构建 “Caco-2 单层屏障模型”（Transwell 小室培养 21 天），用于药物口服吸收效率评估、肠上皮损伤修复研究；②分子表型：表达维甲酸结合蛋白 I/II（参与维甲酸调控的分化过程）、角质蛋白（上皮细胞标志物），且无胃癌相关的 CEA/TAG72 高表达，体现结直肠肿瘤的器官特异性；③应用场景：广泛用于结直肠癌肠上皮分化机制研究（如 Wnt/β-catenin 信号通路调控）、药物研发（体外肠吸收筛选）、消化道跨器官对比实验，同时可与胃癌细胞搭配开展 “肠 – 胃” 肿瘤分化差异研究，探索消化道肿瘤分化调控的器官特异性。
- STR 位点信息：Amelogenin：X（与男性性别标注矛盾，推测为 STR 检测时 Y 染色体部分缺失或标注误差，建议实验前通过 SRY 基因 PCR 或染色体核型分析验证性别，避免性别误差影响激素相关实验（如雄激素对结直肠癌的影响））; CSF1PO：11；D13S317：11，13，14（多等位基因，体现结直肠癌细胞染色体不稳定）；D16S539：12，13；D18S51：12；D19S433：15；D21S11：30，32；D2S1338：17，19.2，25（多等位基因）；D3S1358：14，17；D5S818：12，13；D7S820：11，12；D8S1179：12，14；FGA：19；TH01：6；TPOX：9，11；vWA：16，18；（STR 位点含多等位基因（如 D13S317、D2S1338），是结直肠癌染色体高度不稳定的典型表现，与 SNU-216（较少染色体异常）、GES-1（正常核型）的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与 ATCC HTB-37 数据比对，确认细胞身份及结直肠特性）
- 生物安全等级：1（低于 HGC-27（等级 2）、WPMY-1（等级 2），操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范，与 SNU-216、GES-1 的安全要求一致，便于实验室统一管理不同安全等级的消化道细胞）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（冻存管含 10% 二甲基亚砜（DMSO）无血清冻存液，经检测复苏后 48 小时存活率≥80%（因长倍增时间，复苏后需 72 小时完全贴壁），且增殖期形态、分化潜能无显著改变；T25 瓶发货时细胞处于增殖期（密度 60%-70%），标注 “需在增殖期传代”，避免用户错过最佳传代时机）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响细胞增殖及肠上皮分化，保障长周期屏障模型构建的可靠性）
- 染色体：85~90，91~100（染色体数目显著多于正常二倍体（46 条），且分为两个区间，体现结直肠癌细胞高度异倍体特征；染色体数目异常与结直肠癌驱动基因突变（如 APC、KRAS）相关，实验设计中需注意染色体倍性对药物靶点表达（如 EGFR）的影响）
- 倍增时间：~60-80 hours（增殖速度极慢，是已梳理消化道肿瘤细胞中最慢的（慢于 SNU-216 的中等增殖、NCI-N87 的 48-80 小时），对数生长期为接种后 48-72 小时，需每 3-4 天镜检细胞密度，待密度达 70% 时传代（避免进入分化期）；实验设计需适配长周期，如药物处理时间建议延长至 96-120 小时，分化实验需设置 14-21 天观察周期）
- 致瘤性：Yes, in nude mice; forms moderately well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade II).（明确的裸鼠成瘤能力，且成瘤病理类型与原发结肠癌一致（中分化腺癌 II 级），成瘤周期长（结合 60-80 小时倍增时间，推测皮下成瘤 4-6 周可见明显肿瘤）；建议接种密度为 2×10⁶cells / 只（高于胃癌细胞），成瘤后通过 HE 染色观察腺管样结构，验证体内肠上皮分化特性，适合开展结直肠癌体内药物 efficacy 长期评估）
- 基因表达情况：keratin（上皮细胞标志物，验证细胞上皮属性）; retinoic acid binding protein 1（维甲酸结合蛋白 I，参与分化调控）; retinol binding protein 2（维甲酸结合蛋白 II，与分化相关）（基因表达与肠上皮分化特性高度关联，可通过 RT-PCR 检测其表达水平，判断细胞分化潜能稳定性；与胃癌细胞（如 SNU-216）的基因表达谱对比，可筛选结直肠癌特异性分化基因）
- 保藏机构：ATCC; HTB-37，BCRJ; 0059，DSMZ; ACC-169，ECACC; 09042001，ECACC; 86010202（国际权威机构（ATCC、DSMZ、ECACC）与地区性机构（BCRJ）多重保藏，细胞来源可追溯性极强，肠上皮分化特性及生物学表型经过全球实验室验证，与 SNU-216（国内保藏）的保藏体系互补，便于跨国家科研协作）
- 培养基：78% MEM+20% FBS+1% PS+1% MEM NEAA（非必须氨基酸）（核心特色：①配方复杂且特殊，区别于所有胃癌细胞的培养基（如 SNU-216 的 RPMI-1640、MKN-45 的 RPMI-1640）；MEM 培养基含低葡萄糖（1g/L），适配长周期分化需求，20% 高 FBS 提供充足营养，1% MEM NEAA（非必须氨基酸）是维持肠上皮分化的关键（缺乏会导致分化能力下降）；②FBS 需选择胎牛来源、低内毒素的优质血清，避免血清中分化抑制因子影响刷状缘形成；③PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响细胞分化及屏障功能）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（增殖期培养箱湿度维持在 70%-80%，分化期（构建屏障模型）湿度提升至 80%，减少培养基蒸发导致的渗透压升高；培养箱内避免剧烈晃动，防止贴壁细胞脱落；与 SNU-216、GES-1 等所有已梳理细胞的培养条件一致，仅需在分化期调整湿度，便于多细胞株并行实验）
- 受体表达情况：This cell line expressed heat stable enterotoxin (Sta, E. coli) and epidermal growth factor (EGF).（明确表达大肠杆菌热稳定肠毒素受体（参与肠道感染相关信号）及 EGF 受体（EGFR，结直肠癌重要治疗靶点），可用于：①肠道感染与肿瘤关联研究（如大肠杆菌感染对结直肠癌细胞的影响）；②EGFR 靶向药物筛选（如西妥昔单抗），设置 EGFR 阴性细胞（如 HCT116）作为对照，验证药物特异性）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配长倍增与分化特性：①选择增殖期细胞（接种后 48-72 小时，未进入分化期），用 0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 3-4 分钟（长于胃癌细胞），镜下见细胞间隙增大即可终止，轻柔吹打避免损伤细胞表面分化相关结构；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 2.5×10⁶cells/mL（高于常规细胞），提升复苏后细胞密度；③冻存流程：4℃平衡 40 分钟→-20℃放置 3 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1.5 分钟融化，离心后用预热的完整培养基（含 NEAA）重悬，直接接种至预温培养瓶）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过完整培养基适应性培养、增殖期形态验证及分化潜能预实验（如短期培养观察贴壁分化趋势），确保核心特性稳定；下单后需提前 1 天配制含 NEAA 的培养基，48 小时内安排发货，可与 SNU-216 同步下单，保障 “消化道跨器官” 实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中避免任何颠簸，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入 37℃培养箱，48 小时内不换液，待细胞完全适应后进入增殖期管理）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，国内运输一般配备 1kg 干冰，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，最大限度缩短运输时间，降低细胞活性损失及分化潜能改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 SNU-216、GES-1 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理，避免生物危害）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①培养基配制与分化维护：严格按 “78% MEM+20% FBS+1% PS+1% MEM NEAA” 配方配制，MEM NEAA 需单独灭菌后按比例添加，不可省略；分化实验（构建屏障模型）需使用 Transwell 小室（0.4μm 孔径），接种密度 5×10⁴cells / 孔，每 2 天换液 1 次，培养 21 天通过跨上皮电阻（TEER）检测屏障完整性（TEER 值≥500Ω・cm² 为合格）；②传代时机把控：仅在增殖期（细胞密度 70%-80%，未出现柱状分化）传代，若细胞长满出现紧密连接，需延长胰酶孵育时间至 5 分钟，且传代后可能因分化状态导致生长缓慢，需耐心培养；③消化道跨器官实验设计：搭配 SNU-216（胃癌）、GES-1（正常胃黏膜）开展实验时，可：a. 检测消化道特异性标志物（结直肠 CK20、胃 CK7）的表达差异，分析器官特异性分子特征；b. 对比结直肠癌与胃癌靶向药物（如 EGFR 抑制剂对 Caco-2、VEGF 抑制剂对 SNU-216）的 IC50 值，评估药物器官特异性；c. 开展药物吸收实验，利用 Caco-2 屏障模型检测药物肠吸收效率，对比胃癌细胞对药物的敏感性，为临床用药提供参考；④分化与致瘤性监测：长期培养中，每 5 代检测维甲酸结合蛋白表达（RT-PCR）、短期分化能力（培养 7 天观察早期分化标志）及染色体数目，若发现分化相关基因下降、染色体数目偏离 85~100 范围，需立即更换低代数种子细胞；⑤STR 性别位点处理：因 Amelogenin：X 与男性标注矛盾，复苏后需通过 SRY 基因 PCR 确认性别，若为女性需重新评估实验设计（如性别相关研究），确保实验严谨性。
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