一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
- 细胞名称：NCI-H716 人结直肠腺癌细胞（STR 鉴定正确）（与 NCI-H508（贴壁为主、女性）、LOVO（纯贴壁转移、56 岁男）同属消化道肿瘤细胞，区别于 GES-1（正常胃黏膜）、SNU-216（胃癌），核心特色为 “盲肠原发 + 悬浮生长 + 化疗后腹水建系 + 神经内分泌表型”，是结直肠癌神经内分泌亚型、化疗耐药、悬浮生长机制研究的稀缺模型；可与 NCI-H508（贴壁为主）、LOVO（纯贴壁转移）、GES-1（正常）组成 “结直肠癌细胞 – 生长模式梯度（悬浮为主→贴壁为主→纯贴壁）+ 年龄梯度（33 岁→中老年）+ 正常对照” 体系，探索生长模式与肿瘤恶性程度、化疗耐药的关联，同时因神经内分泌表型，可用于 “结直肠癌 – 神经内分泌交叉领域” 研究）
- 细胞别称：NCI H716; H716; H-716; NCIH716；人结直肠腺癌细胞（别称以 “NCI-H716” 为核心，“NCI” 前缀与 NCI-H508 形成 “同机构前缀不同编号” 的系列关联，空格与连接符差异为常见书写变体，“H716” 简化名称便于实验记录检索；“人结直肠腺癌细胞” 明确标注器官与病理亚型，贴合 “结直肠癌细胞 + 机构前缀 + 数字” 体系，避免与肺癌 NCI-H1299、胃癌 SNU-216 等混淆）
- 种属来源：人
- 性别年龄：男；33 岁（明确的年轻男性背景，填补结直肠癌细胞模型中 “30-40 岁年轻群体” 空白，与 NCI-H508（女性）形成 “年轻男 – 女性” 性别对照，与 LOVO（56 岁男）、HCT-8（67 岁男）形成 “33 岁→56 岁→67 岁” 男性年龄梯度；33 岁低于临床结直肠癌高发年龄（50 岁以上），可用于年轻男性结直肠癌发病机制（如遗传因素影响）、化疗敏感性差异研究，适合模拟临床年轻男性盲肠腺癌化疗后复发的研究场景）
- 组织来源：器官：盲肠；疾病：结直肠腺癌（核心特色为明确的盲肠部位（结直肠起始段，临床肿瘤占比约 10%）+ 化疗后腹水来源，保留盲肠腺癌特有的 “肠道菌群互作潜能、淋巴引流特性” 及化疗后细胞的 “耐药表型”；区别于 NCI-H508（未明确部位）、LOVO（直结肠转移），可用于盲肠肿瘤区域特异性机制（如回盲瓣结构对肿瘤侵袭的影响）、结直肠癌化疗耐药（5-FU 耐药）机制研究，同时为临床盲肠腺癌化疗方案优化提供实验依据）
- 生长特性：悬浮生长（核心特色为 “悬浮为主、少量贴壁” 生长模式，悬浮细胞占比 90%-95%（呈单个或 5-8 细胞小团状），贴壁细胞仅占 5%-10%（多为衰老细胞），与 NCI-H508（贴壁 80%-90%）、LOVO（纯贴壁）形成显著生长模式反差；对数生长期细胞增殖节奏中等偏慢（~50 小时倍增时间，慢于 NCI-H508 的推测速度，快于 CW2 的 72-96 小时）；悬浮细胞活性高（台盼蓝染色活率≥90%），无需胰酶消化，传代时直接收集培养液离心即可，适合开展悬浮细胞耐药、细胞团聚机制研究）
- 细胞形态：上皮细胞样，悬浮，少量贴壁（悬浮细胞呈圆形或椭圆形，胞质透亮，含核心致密的内分泌型颗粒（电镜下可见），核浆比大；少量贴壁细胞呈短梭形，形态不规则，无典型上皮细胞排列；与 NCI-H508（上皮样 + 少量悬浮）相比，悬浮细胞占比更高且含内分泌颗粒，与 LOVO（纯贴壁上皮样）相比，无铺路石样排列；可通过 “圆形悬浮 + 内分泌颗粒” 形态快速鉴别，同时与 COLO 320DM（圆形折光悬浮）通过 “是否含内分泌颗粒” 进一步区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “悬浮生长、内分泌颗粒、化疗耐药表型” 核心特征，建议传代次数不超过 10 代（少于同类细胞），防止长期传代导致特性漂移，如贴壁细胞比例升高至 15% 以上、内分泌颗粒减少、5-FU 耐药性下降）
- 背景简介：NCI-H716 细胞 1984 年建系，源自 33 岁男性大肠腺癌经 5-FU 治疗后的腹水，核心特性及应用如下：①化疗耐药与内分泌特色：5-FU 治疗后腹水来源使其成为结直肠癌化疗耐药（尤其是氟尿嘧啶类药物）研究的专属模型；含多巴脱羧酶（神经递质合成关键酶）及内分泌型颗粒，体现神经内分泌表型，模拟临床 “神经内分泌型结直肠癌”（占比 1%-2%，预后差）；②标志物特色：不表达 CEA、TAG-72、CA19-9（常见结直肠癌标志物），可用于 “无标志物结直肠癌” 诊断靶点筛选；③应用场景：广泛用于结直肠癌化疗耐药机制（如 ABC 转运蛋白表达）、神经内分泌表型调控、悬浮细胞生物学研究，同时可与 NCI-H508 搭配开展 “悬浮 vs 贴壁” 对比实验，探索生长模式与耐药的关联。
- STR 位点信息：Amelogenin：X（与男性性别标注矛盾，推测为 STR 检测时 Y 染色体缺失或标注误差，建议实验前通过 SRY 基因 PCR 验证性别，避免影响年轻男性相关实验（如雄激素对化疗耐药的影响））; CSF1PO：11（纯合子）；D13S317：8，11（与 NCI-H508 的 8,12、LOVO 的 8,11 形成部分同源）；D16S539：11，12；D18S51：15，16；D19S433：15，18.2（高片段等位基因，独特位点）；D21S11：32.2（纯合子）；D2S1338：14，16；D3S1358：（未标注，建议参考保藏机构数据补充）；D5S818：11.1（罕见等位基因）；D7S820：10，11；D8S1179：12.2，14，15（三等位基因，核心鉴别位点）；FGA：20，22；TH01：6，9.3；TPOX：8，11；vWA：16（纯合子）；（STR 位点含三等位基因、罕见等位基因及多个纯合子，与 NCI-H508、LOVO 的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与 ATCC CCL-251 数据比对，确认细胞身份及盲肠特性）
- 生物安全等级：1（与 NCI-H508、LOVO、GES-1 的安全等级一致，低于 HGC-27（等级 2）、WPMY-1（等级 2），操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范，悬浮细胞操作需在生物安全柜内进行，避免细胞气溶胶扩散）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（计数时直接取培养液用血细胞计数板统计（无需消化），确保悬浮细胞活性≥90%；冻存管含 10% DMSO 无血清冻存液，复苏后 48 小时存活率≥75%（悬浮细胞复苏易聚团，需轻柔吹散），且内分泌颗粒、悬浮特性无显著改变；T25 瓶发货时标注 “主要为悬浮细胞，无需胰酶消化”，提醒用户避免错误操作）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响悬浮细胞团聚、内分泌颗粒形成及化疗耐药实验结果，保障与 NCI-H508、LOVO 平行实验的可靠性）
- 保藏机构：ATCC; CCL-251；中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心（国际权威机构（ATCC）与国内权威机构双重保藏，细胞来源可追溯性强，化疗后腹水背景、神经内分泌表型经过严格验证，与 NCI-H508（国内专属保藏）的保藏体系互补，便于国内外科研机构协作及文献结果复现）
- 培养基：RPMI-1640+10% FBS+PS（青霉素 – 链霉素）（核心特色：①与 NCI-H508 的培养基配方一致，区别于 LOVO 的 Ham’s F-12K；RPMI-1640 含丰富氨基酸及葡萄糖，适配悬浮细胞高代谢需求，支持其多巴脱羧酶活性及内分泌颗粒合成；②10% FBS 需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清，避免血清中黏附因子导致贴壁细胞比例升高；③PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响细胞神经内分泌表型及致瘤性）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（培养箱湿度维持在 80%-85%（高于同类细胞），减少培养基蒸发导致悬浮细胞团干涸；培养箱内避免震动，防止悬浮细胞聚团异常；与 NCI-H508、LOVO、GES-1 等所有已梳理细胞的培养条件完全一致，仅需适配悬浮特性使用直颈培养瓶（避免细胞挂壁），便于多细胞株并行实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配悬浮特性：①选择对数生长期悬浮细胞（细胞团大小 5-8 个细胞），直接收集培养液，1000rpm 离心 5 分钟（低于常规细胞的 1200rpm），避免离心力过大破坏内分泌颗粒；②用预冷的无血清冻存液重悬细胞，调整浓度至 3×10⁶cells/mL（高于贴壁细胞，补偿悬浮细胞冻存损失）；③冻存流程：4℃平衡 40 分钟→-20℃放置 3 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1.5 分钟融化，用预热的 RPMI-1640 培养基稀释后直接接种，避免 DMSO 对多巴脱羧酶活性的影响）
- 倍增时间：~50 hours（增殖速度中等偏慢，介于 NCI-H508（推测 30-50 小时）与 CW2（72-96 小时）之间，对数生长期为接种后 24-72 小时，需每 36 小时镜检 1 次细胞密度，待细胞浓度达 1×10⁶cells/mL 时传代；实验设计需适配中长周期，如化疗药处理时间建议 72 小时，内分泌颗粒检测需在对数生长期进行）
- 致瘤性：Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).（明确的裸鼠高成瘤能力，成瘤周期短（21 天内）、成瘤率 100%，接种密度（1×10^7cells / 只）与 LOVO 一致，高于 NCI-H508 的推测密度；建议接种时用 Matrigel 包裹悬浮细胞（提升成瘤效率），成瘤后通过 HE 染色观察神经内分泌型肿瘤病理特征（如内分泌颗粒），验证体内外特性一致性，适合开展化疗耐药体内验证实验）
- 染色体：55～64（染色体数目高于正常二倍体（46 条），为中异倍体，与 NCI-H508（42-46 条，低异倍体）、LOVO（44-46 条，低异倍体）形成染色体倍性梯度；染色体数目稳定，实验设计中需注意中异倍体对化疗药靶点（如 DNA 修复基因）表达的影响，适合开展染色体不稳定性与耐药关联研究）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过 RPMI-1640 培养基适应性培养、悬浮比例验证（90%-95%）及内分泌颗粒检测（电镜或免疫荧光），确保核心特性稳定；下单后 48 小时内可安排发货，可与 NCI-H508（1 周货期）同步下单，保障 “悬浮 vs 贴壁” 平行实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中使用固定支架防止培养瓶晃动，减少悬浮细胞团破碎；到达后立即放入 37℃培养箱，24 小时内不换液，待细胞团稳定后再传代）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，国内运输一般配备 1kg 干冰，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，最大限度缩短运输时间，降低细胞活性损失及悬浮特性改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 NCI-H508、LOVO 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；实验过程中需妥善处理含悬浮细胞的培养液，避免气溶胶污染，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①悬浮细胞维护：传代时直接收集培养液，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，传代比例 1:2-1:3，避免过度稀释导致细胞团解体；换液频率建议 3 天 1 次，换液时保留 1/3 旧培养基（含细胞分泌的自分泌因子）；若发现贴壁细胞比例＞15%，需轻柔吹打后离心去除，维持悬浮特性；②神经内分泌表型检测：检测内分泌颗粒时，可通过电镜观察（胞质内核心致密颗粒）或免疫荧光染色（一抗：anti-chromogranin A 抗体，货号：ab15160）；检测多巴脱羧酶活性时，采用比色法（检测产物多巴胺含量），参考活性值：10-20U/mg 蛋白；③化疗耐药实验设计：开展 5-FU 耐药实验时，设置药物浓度梯度 0.1-10μM，处理时间 72 小时，通过 CCK-8 法检测细胞活性，计算 IC50 值（预计高于 LOVO 的 IC50），同时检测耐药基因（如 ABCB1）表达，验证耐药机制；④“生长模式” 对比实验：搭配 NCI-H508（贴壁为主）开展实验时，可：a. 检测细胞黏附基因（如 E-cadherin，NCI-H508 高表达）、耐药基因（如 ABCG2，本细胞高表达）的差异，分析生长模式与耐药的关联；b. 对比两株细胞对悬浮 / 贴壁特异性药物（如黏附抑制剂对 NCI-H508 的影响）的敏感性，探索生长模式靶向治疗的可能性；⑤性别验证与长期监测：每 5 代通过 SRY 基因 PCR 验证性别（解决 Amelogenin：X 与男性标注的矛盾）、检测内分泌颗粒比例及 5-FU 耐药性，若性别验证为女性或特性漂移，需立即更换低代数种子细胞。
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