一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代操作

• 当细胞密度达 70%-80%（长梭状细胞沿同一方向排列，无明显堆叠）时，弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免冲散贴壁细胞。
• 加入胰酶温和消化，待长梭状细胞边缘收缩、间隙增大（约 1-2 分钟）后，立即加专用培养基终止消化，防止过度消化破坏细胞形态。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液，按 1:3-1:5 比例接种到新培养瓶，全程避免剧烈操作，维持平滑肌细胞的长梭状特征与永生化活性。

2. 换液与抗性维持

• 每 2-3 天更换 1 次新鲜专用培养基，若需维持嘌呤霉素抗性，需在培养基中添加终浓度 2-4μg/mL 的嘌呤霉素（具体浓度以随货说明书为准），抑制可能存在的未转染杂细胞。
• 换液时先缓慢倾倒旧培养基，再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量专用培养基，避免代谢废物残留影响细胞增殖。

3. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、长梭状形态均一）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清，收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装到冻存管后，按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对细胞的损伤。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化），避免反复冻融导致细胞死亡。
• 加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的专用培养基重悬细胞后接种，24 小时后观察细胞贴壁情况，48 小时后按常规换液并加入嘌呤霉素维持抗性。