一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：人骨髓间充质干细胞永生化
种属来源：人
组织来源：骨髓（通过冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备，具备多向分化潜能）
生长特性：贴壁生长（体外培养对环境敏感，需严格控制贴壁条件）
细胞形态：长梭状、不规则细胞（典型间充质干细胞形态，排列呈漩涡状或放射状）
背景补充：作为骨髓中含量极低（占有核细胞 0.001%-0.1%）的干细胞，可向骨、软骨、肌组织等多方向分化，是组织工程常用种子细胞；培养受贴壁时间、种植密度、血清含量等多因素影响
细胞代数：10 代以内
细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管
支原体检测：无
培养基：人骨髓间充质干细胞永生化专用培养基
培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃，培养基 pH 维持在 7.2-7.4（严格控制酸碱环境，保障细胞活性）
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
细胞货期：现货，1 周左右
运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递
供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
培养核心操作
1. 传代操作
- 当细胞密度达 80%-90%（长梭状细胞呈漩涡状排列，无明显堆叠，保留典型干细胞形态）时，弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 2 次（去除残留血清，避免影响消化效果）。
- 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、间隙增大（约 1-2 分钟，间充质干细胞消化敏感，需密切观察，避免过度消化导致分化）后，立即加专用培养基终止消化。
- 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，防止细胞断裂），按 1:3-1:4 比例接种到新培养瓶（控制种植密度，避免密度过低影响增殖或过高导致分化），维持其永生化特性与多向分化潜能。
2. 换液操作
- 每 2-3 天更换 1 次新鲜专用培养基，换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量培养基覆盖细胞。
- 若发现细胞形态异常（如梭状变短、排列紊乱），需检查培养基 pH 值或新鲜度，及时更换以避免细胞分化；首次复苏后 48 小时内不换液，让细胞充分贴壁。
3. 冻存操作
- 选取对数期（增殖旺盛、长梭状形态均一、无杂细胞）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
- 用预冷的无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温（缓慢降温减少细胞损伤，保留干细胞活性）。
4. 复苏操作
- 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏干细胞特性），迅速将细胞悬液转移至离心管。
- 加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的专用培养基重悬细胞后接种；复苏后 24 小时观察贴壁情况，48 小时后按常规换液，避免过早操作影响细胞恢复。
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