一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代操作

• 当细胞密度达 70%-80%（梭形细胞均匀分布，无明显堆积）时，弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次。
• 加入胰酶温和消化，待梭形细胞边缘收缩、间隙增大后，立即加专用培养基终止消化。
• 轻柔吹打细胞至单细胞悬液，按 1:3-1:5 比例接种到新培养瓶，避免剧烈吹打导致细胞损伤，影响永生化特性。

2. 换液与抗性维持

• 每 2-3 天更换 1 次新鲜专用培养基，若需维持嘌呤霉素抗性，可在培养基中添加终浓度 2-5μg/mL 的嘌呤霉素（具体浓度以随货说明书为准），抑制未转染细胞污染。
• 换液时先弃去旧液，用 PBS 冲洗 1 次，再加入足量培养基，避免代谢废物堆积影响细胞增殖。

3. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、梭形形态均一）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装到冻存管后，按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少冻存损伤。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化），避免反复冻融破坏细胞。
• 加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热的专用培养基重悬后接种，24 小时后观察细胞贴壁情况，48 小时后正常换液。