一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：小鼠骨髓间充质干细胞永生化 – GFP-PURO (GFP 标记，通过永生化处理突破原代细胞增殖限制，GFP 可直观追踪细胞)
种属来源：小鼠
组织来源：骨髓血组织
生长特性：贴壁生长
细胞形态：成纤维细胞样（典型骨髓间充质干细胞形态特征）
背景介绍：骨髓间充质干细胞（BMSCs）是骨髓基质干细胞，对造血干细胞（HSC）有机械支持作用，还能分泌 IL-6、IL-11、LIF、M-CSF、SCF 等生长因子支持造血；具有骨、软骨、肌肉、脂肪等多向分化潜能。原代 BMSCs 含量极低（骨髓有核细胞总数的 0.001%~0.1%），且分离难度大，该细胞通过慢病毒转染携带 SV40 基因（实现永生化）与 GFP 基因（实现荧光标记），同时携带嘌呤霉素抗性，解决原代细胞增殖与追踪难题
细胞代数：10 代以内（低传代，更好维持永生化特性、GFP 活性及骨髓间充质干细胞多向分化功能）
细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装
支原体检测：无（无支原体污染，避免干扰细胞增殖、分化功能及实验结果，保障数据准确性）
培养基：GFP-puro 小鼠骨髓间充质干细胞永生化专用培养基（不可用普通培养基替代，保障细胞永生化特性与分化潜能）
背景与应用价值
核心优势
- 永生化特性：通过 SV40 基因转染，突破原代 BMSCs 体外增殖限制，可长期培养且生物特性稳定，无需频繁分离原代细胞，降低实验难度；
- 可视化追踪：稳定表达 GFP，可通过荧光显微镜直接观察细胞形态、分布及增殖情况，适用于细胞迁移、共培养、体内移植等需追踪的实验；
- 功能保留：保留原代 BMSCs 的多向分化潜能与造血支持功能，可用于组织工程种子细胞研究、造血微环境机制探索、干细胞治疗相关预实验。
实验应用方向
- 体外研究：骨髓间充质干细胞多向分化机制（如成骨、成脂诱导实验）、造血支持因子分泌检测、干细胞与其他细胞（如造血干细胞）共培养研究；
- 体内研究：干细胞体内移植后的分布与存活追踪（利用 GFP 荧光信号）、组织损伤修复效果评估、免疫调节功能研究。
细胞培养核心信息
基础参数
保藏机构：未明确标注，可通过随货产品说明书或供应商获取详细溯源信息，确保细胞株稳定性、永生化特性及骨髓间充质干细胞属性可靠。
培养与冻存
培养条件
气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（常规 CO₂培养环境即可，需确保培养箱温度、湿度稳定，避免环境波动影响细胞增殖与分化潜能）；
操作注意事项（针对永生化干细胞特性）
- 传代操作：
- 细胞贴壁生长至密度 80%-90% 时传代（密度过低易导致细胞生长缓慢，过高易出现接触抑制）；
- 用胰酶温和消化，待成纤维细胞样形态边缘收缩、细胞间隙增大后，立即加专用培养基终止消化，轻柔吹打分散细胞（避免剧烈吹打损伤细胞，影响分化功能）；
- 传代比例建议 1:3-1:5，确保传代后细胞密度适宜，维持对数生长期。
- GFP 保护：GFP 对光敏感，避免长时间强光直射培养瓶，观察荧光时缩短暴露时间，减少荧光信号淬灭；
- 分化实验适配：进行成骨、成脂等分化诱导前，需选择对数生长期细胞，且确保细胞传代次数不超过 10 代，避免长期培养导致分化潜能下降；
- 培养基管理：专用培养基需按说明书要求储存（如避光冷藏），使用前平衡至室温，避免反复冻融导致成分失效。
冻存与复苏
- 冻存液：无血清冻存液；
- 冻存要点：选择对数生长期、状态良好的细胞（GFP 荧光均匀、无分化迹象），胰酶消化收集后，用专用培养基清洗 1 次，再用冻存液重悬，调整细胞密度至 2×10⁶-5×10⁶cells/ml；梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮长期保存），避免降温过快损伤细胞；
- 复苏要点：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速融化（约 1-2 分钟，避免反复冻融）；1000rpm 离心 5 分钟弃冻存液，用预热至 37℃的专用培养基重悬细胞；复苏后细胞贴壁较慢，需静置 24-48h 再观察，优先确认细胞贴壁情况、成纤维细胞样形态及 GFP 荧光强度（荧光均匀无衰减为状态正常）。
货期与运输
细胞货期：现货，1 周左右；
运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；
运输注意事项：复苏发货时，用防震包装减少颠簸，降低贴壁细胞脱落概率；冻存发货需确保干冰量充足，维持细胞冻存状态，保障接收后细胞活性、永生化特性及 GFP 表达稳定。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用；不可用于人体干细胞移植相关实验，需严格遵循干细胞研究伦理规范。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；开展分化实验时，需结合专用培养基与对应的诱导试剂盒（如成骨诱导液、成脂诱导液），并通过染色（如茜素红染色鉴定成骨、油红 O 染色鉴定成脂）确认分化效果；利用 GFP 追踪时，可通过荧光定量技术（如流式细胞术）分析细胞存活与增殖效率，提升实验数据的精准度。
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