一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代：
   • 细胞密度达 70%-80%（铺路石状细胞铺满瓶壁约 80%）时，用胰酶温和消化，加专用培养基终止；
   • 操作时避免剧烈吹打，防止铺路石状及不规则细胞形态被破坏，传代比例参考 1:2-1:4，保障永生化细胞的稳定增殖特性。
2. 换液：
   • 每 2-3 天更换新鲜专用培养基，清除代谢废物；
   • 及时补充营养，避免因营养不足影响细胞活性，维持其作为小肠上皮细胞的典型铺路石状形态及生理功能相关特征。
3. 冻存：
   • 选取对数期（增殖旺盛、形态均一）的细胞，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清；
   • 用冻存液重悬至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，梯度降温后存入液氮，确保复苏后细胞仍保持永生化特性及小肠上皮细胞的形态特征。
4. 复苏：
   • 37℃水浴速融冻存管，立即加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释；
   • 离心弃上清后用预热的专用培养基重悬，接种后静置 24-48h，观察贴壁情况及铺路石状、不规则细胞形态恢复。