一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：A375-FLUC-eGFP-puro 人恶性黑色素瘤细胞 (FLUC/eGFP 双标)（STR 鉴定正确）
细胞别称：A375-LUC-EGFP；人恶性黑色素瘤细胞 – 荧光素酶标记 – 绿色荧光标记；A375 – 荧光素酶标记 – 绿色荧光标记
种属来源：人
组织来源：皮肤
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞代数：p3-p8（极低传代范围，能最大程度维持 FLUC/eGFP 双荧光标记稳定性及恶性黑色素瘤特有的成瘤、克隆形成能力）
生物安全等级：1 级
背景与筛选验证
背景介绍
A375-FLUC-eGFP-puro 细胞稳定共表达萤火虫荧光素酶（FLUC）与增强型绿色荧光蛋白（eGFP），性状稳定，培养时无需抗生素常规维持。既可作为双荧光活性检测的阳性对照，也适用于恶性黑色素瘤体内成像实验（如皮下成瘤、转移模型的双荧光追踪）。
该细胞通过慢病毒转染携带 Luc 基因，亲本 A-375 细胞具备明确生物学特征：源自 54 岁女性，在抗胸腺细胞球蛋白、血清处理的 NIH 瑞士小鼠中可形成快速增长的皮下肿瘤，且能在普通成纤维细胞和琼脂上形成克隆，是研究恶性黑色素瘤发病机制、药物筛选的经典细胞株。
puro 药筛浓度
A375-LUC 细胞 puro（嘌呤霉素）药筛浓度为 1.0μg/ml，用于去除未转染细胞；培养过程中建议使用 0.5μg/ml 浓度 puro 维持。低浓度维持可保障双荧光基因稳定表达，同时不影响细胞贴壁生长、皮下成瘤及克隆形成能力。
细胞培养核心信息
基础参数
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装；
- 支原体检测：无（无支原体污染，避免干扰细胞增殖、双荧光表达及恶性黑色素瘤相关实验结果，保障数据准确性）；
- 保藏机构：ATCC; CRL-1619、ATCC; CRL-7904、BCRC; 60039、BCRJ; 0278（细胞来源可追溯，确保细胞株稳定性与恶性黑色素瘤特性可靠）。
培养与冻存
- 培养基：DMEM（达尔伯克改良伊格尔培养基）+10% FBS（胎牛血清）+PS（青霉素 – 链霉素双抗）+1.0μg/ml puro（仅药筛阶段按此浓度添加，常规培养建议用 0.5μg/ml puro 维持，适配贴壁生长的恶性黑色素瘤细胞营养需求）；
- 培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规 CO₂培养环境即可，无需特殊调整；避免强光直射，减少 eGFP 光漂白，保障双荧光观测效果）；
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存前确保细胞处于对数生长期，保留双荧光特性与成瘤能力；可适当提高冻存密度，减少复苏损伤，复苏后优先观察双荧光表达与细胞贴壁情况）。
货期与运输
- 细胞货期：现货，1 周左右；
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；运输过程需尽量减少颠簸，降低细胞脱落概率。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；因细胞传代范围限定 p3-p8，建议收到后尽快开展实验，避免过度传代影响特性。
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