一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
- 细胞名称：A549 人非小细胞肺癌细胞（STR 鉴定正确）（与 SW620（结直肠转移、51 岁男）、HCT-15（结直肠快增殖、男）同属人类肿瘤细胞，区别于 GES-1（正常胃黏膜）、SW1116（结肠原发），核心特色为 “58 岁白人男性肺来源 + KRAS 纯合突变 + 快增殖 + 肺特异性代谢”，是肺癌发病机制、KRAS 靶向治疗、肺肿瘤代谢研究的 “标杆级” 模型；可与 SW620（结直肠转移）、GES-1（正常胃黏膜）、BEAS-2B（正常支气管上皮）组成 “不同器官肿瘤（肺 – 结直肠）+ 正常对照（胃 – 支气管）” 体系，探索跨器官肿瘤的共性（快增殖）与特异性（器官代谢、突变谱），同时因明确 KRAS 突变，可作为肺癌 KRAS 靶向药物筛选的标准细胞株）
- 细胞别称：A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549（别称以 “A549” 为核心，“NCI-” 前缀体现与 NCI-H 系列肿瘤细胞的关联，大小写、空格差异为常见书写变体，“hA549” 标注人种（人），统一标注便于实验记录检索；无器官歧义，直接关联 “非小细胞肺癌”，贴合 “肺癌细胞 + 字母数字组合” 的精准命名体系，避免与结直肠、胃等其他器官癌细胞混淆）
- 种属来源：人
- 性别年龄：58 岁，白人男性（明确的中老年白人男性背景，填补肺癌细胞模型中 “白人男性” 空白，与 SW620（51 岁亚裔男推测）形成 “白人 – 亚裔” 种族对照，与 HCT-8（67 岁男）形成 “中老年 – 老年” 男性年龄梯度，与 HT-29（44 岁女）形成 “中老年男 – 中年女” 性别对照；58 岁符合肺癌高发年龄（50 岁以上），白人种族背景可用于种族相关肺癌发病机制研究（如基因突变频率差异），适合模拟临床白人男性非小细胞肺癌的研究场景）
- 组织来源：肺（明确为肺组织来源，推测为非小细胞肺癌中的腺癌亚型（因能合成卵磷脂，符合肺腺癌细胞特征），保留肺肿瘤特有的 “肺泡上皮代谢、气体交换相关功能残留” 特性；区别于 SW620 的结直肠淋巴结转移、HCT-15 的结肠原发，可用于肺癌原发灶机制研究（如肺内侵袭、与支气管上皮的相互作用）、肺癌与结直肠癌的跨器官转移差异对比，同时为临床非小细胞肺癌诊断标志物（如 KRAS 突变）验证提供实验依据）
- 生长特性：贴壁生长（纯贴壁生长模式与 SW620、HCT-15 一致，核心特色为快增殖（~22 小时倍增时间，与 SW620 的 20-26 小时相近，略慢于 HCT-15 的 20-25 小时）；对数生长期为接种后 10-36 小时，贴壁强度高于 SW620、与 HCT-15 相近，细胞间连接紧密，呈单层密集分布（因快增殖）；传代需每天镜检 1 次，待密度达 70%-80% 时按 1:3-1:4 传代（与 SW620 一致），适合开展短周期肺癌实验（如药物筛选、突变功能验证）及跨器官快增殖肿瘤对比研究）
- 细胞形态：上皮细胞样（细胞展开后呈多边形，排列规整呈铺路石样，胞质丰富，含肺上皮特有的分泌颗粒（电镜下可见），核浆比适中（快增殖细胞特征），具备非小细胞肺癌腺癌细胞典型上皮形态；角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性（验证上皮属性）；与 SW620（结直肠转移、排列松散）相比，排列更紧密，与 HCT-15（结肠、快速增殖）相比，形态更规整且含肺特异性颗粒；可通过 “上皮样 + 快增殖 + 肺来源” 结合 KRAS 突变快速鉴别，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞（上皮样）通过肺特异性标志物（如 TTF-1）进一步区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “KRAS 纯合突变、肺特异性代谢、快增殖” 核心特征，建议传代次数不超过 12 代，防止长期传代导致特性漂移，如增殖速度减慢（＞28 小时）、KRAS 突变杂合化、卵磷脂合成能力下降）
- 背景介绍：A549 细胞系由 D.J.Griad 通过肺癌组织移植培养建系，患者为 58 岁白人男性，核心特性及应用如下：①代谢与突变特色：能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂（肺表面活性物质主要成分，体现肺上皮细胞特性），KRAS 基因 p.Gln37Ter 纯合突变（明确致癌驱动突变），是肺癌代谢机制、KRAS 靶向治疗研究的理想模型；②应用场景：广泛用于非小细胞肺癌发病机制（如 KRAS 信号通路）、肺肿瘤代谢（卵磷脂合成调控）、靶向药物筛选（KRAS 抑制剂），同时可与 SW620（结直肠转移）搭配开展 “不同器官快增殖肿瘤” 对比实验，探索跨器官肿瘤的分子差异）
- STR 位点信息：Amelogenin：X，Y（明确男性性别，与性别年龄栏一致，验证细胞身份，排除交叉污染，与 SW620（X，男性争议）、HCT-15（X,Y）共同确认男性肿瘤细胞身份）; CSF1PO：10，12；D13S317：11（纯合子，与 SW620 的 12 纯合子差异，体现器官特异性）；D16S539：11，12；D18S51：14，17（与 SW620 的 13 纯合子差异）；D19S433：13（纯合子）；D21S11：29（纯合子，与 SW620 的 30,30.2 差异）；D2S1338：24（纯合子，与 SW620 一致，跨器官共性位点）；D3S1358：16（纯合子）；D5S818：11（纯合子）；D7S820：8，11；D8S1179：13，14；FGA：23（纯合子）；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：14（纯合子）；（STR 位点含跨器官共性位点（如 D2S1338）及大量肺肿瘤特异性纯合子，与 SW620、HCT-15 的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与 ATCC CCL-185 数据比对，确认细胞身份及肺来源特性）
- 基因变异信息：KRAS 基因 p.Gln37Ter (c.109C>T) 纯合突变（ClinVar 编号 VCV000376334）（核心致癌突变：①突变特征：第 37 位谷氨酰胺（Gln）变为终止密码子（Ter），导致 KRAS 蛋白截短失活，纯合突变表明该突变为主要致癌驱动因素；②检测与应用：可通过 Sanger 测序（引物设计覆盖 109 位碱基）验证突变状态，作为 KRAS 突变检测的阳性对照；适合开展 KRAS 失活相关信号通路研究（如 MAPK 通路抑制）、KRAS 靶向药物（如 Sotorasib）敏感性实验，与 KRAS 野生型细胞（如 H1299）形成突变 / 野生型对照）
- 生物安全等级：1（与 SW620、HCT-15、GES-1 的安全等级一致，低于 HGC-27（等级 2）、WPMY-1（等级 2），操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范，因快增殖特性，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理，避免细胞残留污染）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（冻存管含 10% 二甲基亚砜（DMSO）无血清冻存液，经检测复苏后 48 小时存活率≥90%（快增殖特性导致复苏活性高），且 KRAS 突变、上皮样形态无显著改变；T25 瓶发货时细胞密度达 60%-70%，标注 “KRAS 纯合突变，建议开展靶向实验时验证突变状态”，提醒用户利用突变特性开展研究）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响细胞快增殖、KRAS 信号通路及卵磷脂合成，保障与 SW620、HCT-15 平行实验的可靠性）
- 保藏机构：ATCC; CCL-185，ATCC; CRM-CCL-185，ATCC; CRL-7909，BCRC; 60074，BCRJ; 0033，DSMZ; ACC-107，ECACC; 86012804；中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心（国际权威机构（ATCC 多编号、DSMZ、ECACC）、地区性机构（BCRC、BCRJ）与国内机构三重保藏，细胞来源可追溯性极强，肺来源特性、KRAS 突变及代谢特征经过多重验证，与 SW620（双机构保藏）的保藏体系互补，便于国内外科研机构协作及文献结果复现）
- 培养基：DMEM+10% FBS+PS（青霉素 – 链霉素）（核心特色：①采用 DMEM 培养基，与 SW620 的 L15、HCT-15 的 RPMI-1640 显著不同；DMEM 含高糖（4.5g/L）及丰富氨基酸，适配肺腺癌细胞的高代谢需求，支持其快增殖及卵磷脂合成；②10% FBS 需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清，避免血清中生长因子异常调控 KRAS 信号通路；③PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响细胞致瘤性及突变表型）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（与 SW620 的 100% 空气形成显著对比，常规 CO₂培养条件适配多数实验室；培养箱湿度维持在 70%-80%，定期更换水盘，防止培养基蒸发导致渗透压升高；培养箱内避免剧烈晃动，防止贴壁细胞脱落；与 HCT-15、GES-1 等常规细胞的培养条件完全一致，无需特殊调整，便于多细胞株并行开展跨器官实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配贴壁及快增殖特性：①选择对数生长期细胞（密度 70%，增殖活性最佳），用 0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 1.5-2 分钟（短于 SW620 的 1.5-2 分钟，因贴壁强度略高），镜下见细胞间隙增大即可终止，轻柔吹打避免细胞破碎；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 3×10⁶cells/mL（与 SW620 一致，补偿快增殖细胞冻存损失）；③冻存流程：4℃平衡 20 分钟→-20℃放置 1.5 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1 分钟融化，离心后用预热的 DMEM 培养基重悬，直接接种于 5% CO₂环境，避免 DMSO 对 KRAS 蛋白功能及卵磷脂合成的影响）
- 染色体：60~66，XY（染色体数目高于正常二倍体（46 条），为中高异倍体，明确 XY 男性核型，与 SW620（48~51,XY）、HCT-15（未明确）形成染色体倍性梯度；染色体数目稳定，实验设计中需注意中高异倍体对 KRAS 靶向药物靶点表达的潜在影响，适合开展精准的突变功能实验）
- 倍增时间：~22 hours（增殖速度快，与 SW620（20-26 小时）相近，略慢于 HCT-15（20-25 小时），对数生长期为接种后 10-36 小时，需每 12 小时镜检 1 次细胞密度，传代间隔 2-3 天；实验设计需适配短周期，如药物处理时间建议 12-24 小时，KRAS 信号通路实验需在对数生长期早期开展（接种后 24 小时内））
- 抗原表达情况：The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining（角蛋白阳性，验证上皮细胞属性，与肺腺癌细胞的上皮来源一致，可通过免疫荧光染色观察角蛋白分布（胞质弥漫性表达），辅助判断细胞纯度，同时与间充质来源肿瘤细胞（如 A549-M3）形成差异）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过 DMEM 培养基适应性培养、KRAS 突变验证（Sanger 测序）及卵磷脂合成能力检测（高效液相色谱法），确保核心特性稳定；下单后 48 小时内可安排发货，可与 SW620（1 周货期）同步下单，保障 “不同器官快增殖肿瘤” 平行实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中使用固定支架防止培养瓶晃动，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入 5% CO₂培养箱，12 小时后观察细胞状态，24 小时内首次换液，确保细胞快速适应环境）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，国内运输一般配备 1kg 干冰，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，最大限度缩短运输时间，降低细胞活性损失及 KRAS 突变特性改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 SW620、HCT-15 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；因具备明确致癌突变，实验过程中需妥善处理含 KRAS 突变细胞的培养基，避免环境暴露，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①KRAS 突变应用：开展靶向实验时，需先用 Sanger 测序验证 KRAS p.Gln37Ter 纯合突变（引物序列：正向 5′-GGCCTGCTGAAAATGACTGA-3’，反向 5′-CTGTATCAAAGAATGGTCCTG-3’），确保突变状态稳定；药物筛选可选择 KRAS 抑制剂（如 Sotorasib，浓度梯度 0.1-10μM），处理 24 小时后用 CCK-8 法检测活性，计算 IC50 值；②肺代谢实验设计：检测卵磷脂合成时，用 [³H]- 胆碱标记培养基，培养 48 小时后提取细胞脂质，通过薄层层析分离卵磷脂，液闪计数检测放射性强度，计算合成速率；③跨器官对比实验：搭配 SW620（结直肠转移）开展实验时，可：a. 检测 KRAS 信号通路相关蛋白（如 p-ERK）的表达差异（A549 因纯合突变可能表达异常），分析器官特异性对突变功能的影响；b. 对比两株细胞对化疗药（如顺铂）的 IC50 值（A549 可能因肺代谢特性 IC50 更高），评估器官差异对药物敏感性的影响；c. 检测上皮标志物（如 CK18，A549 高表达）的差异，验证器官特异性分子特征；④长期培养监测：每 5 代检测 KRAS 突变状态（Sanger 测序）、倍增时间（需在 22 小时左右）及染色体数目（60~66 条），若发现突变丢失或特性漂移，需立即更换低代数种子细胞；⑤培养
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