一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代操作

• 观察细胞密度与活性，当密度达 1.5×10⁶-3×10⁶cells/mL（台盼蓝染色活率≥90%）时，按 1:2-1:3 比例加入新鲜专用培养基稀释传代（该细胞增殖速度中等，需控制密度避免营养不足）。
• 无需胰酶消化，用移液器轻柔吹打细胞悬液 3-5 次，确保分散为单细胞悬液；避免用力过猛导致细胞破裂，影响后续实验（如免疫相关检测）。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次培养基，将细胞悬液转移至离心管，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清（若需检测细胞分泌的细胞因子，可保留上清低温储存）。
• 用新鲜专用培养基重悬细胞沉淀，调整密度至 1×10⁶cells/mL 左右后放回培养瓶；若发现少量小聚团（直径＜30μm），可轻柔吹打分散，防止聚团细胞因缺氧死亡。

3. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、悬浮分散均一、活率≥95%）的细胞悬液，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用预冷的无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装到冻存管后，按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对淋巴细胞的损伤，保留其白血病细胞特性。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至含预热专用培养基的离心管（培养基体积为冻存液的 5 倍）。
• 1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用新鲜专用培养基重悬细胞后接种；复苏后 24 小时内不扰动培养瓶，48 小时后观察细胞存活状态，活率达标后再进行传代或实验（如流式细胞术检测 B 细胞标志物）。