一、细胞基本属性(客服:小烽:18030101858)
- 细胞名称:C918 人眼脉络黑色素瘤细胞(STR 鉴定正确)(与 MET-5A(皮肤正常间皮)、SK-MES-1(肺鳞癌胸水转移)同属贴壁生长细胞,区别于 BEAS-2B(肺正常上皮)、PC-9(肺腺癌),核心特色为 “眼脉络黑色素瘤来源 + 多角形细胞样 + 交叉污染嫌疑 + RPMI-1640 培养基”,是眼黑色素瘤机制研究、跨器官肿瘤对比、细胞交叉污染验证的专属模型;可与 MET-5A(正常皮肤间皮)、SK-MES-1(肺鳞癌)、HFL-1(正常肺成纤维)组成 “多器官正常 / 肿瘤细胞(眼黑色素瘤 / 皮肤间皮 / 肺鳞癌)” 体系,探索眼黑色素瘤与其他器官肿瘤的生物学差异及交叉污染对实验结果的影响,同时因黑色素瘤特性,适合开展黑色素合成、侵袭转移相关实验)
- 细胞别称:C918;人眼脉络黑色素瘤细胞(别称以 “C918” 为核心,无复杂变体,“人眼脉络黑色素瘤细胞” 明确标注 “眼脉络 + 黑色素瘤” 双重属性,与 “MET-5A”“SK-MES-1” 等非眼来源细胞前缀形成清晰区分;精准定位 “眼器官 + 黑色素瘤亚型”,避免与皮肤黑色素瘤细胞(如 A375)、肺肿瘤细胞(SK-MES-1)混淆,贴合 “眼肿瘤细胞 + 字母数字 + 肿瘤类型” 的命名体系)
- 种属来源:人
- 性别年龄:未明确(建议实验前通过 STR 位点 Amelogenin 基因(若补充检测)或 SRY 基因 PCR 验证性别,参考临床眼脉络黑色素瘤高发年龄(50-70 岁)推测为中老年个体,与 MET-5A(成人推测)形成 “中老年肿瘤 – 成人正常” 年龄对照,与 SK-MES-1(65 岁男成人肺鳞癌)形成 “同年龄层不同器官肿瘤” 对照,与 HFL-1(胎儿男正常)形成 “中老年肿瘤 – 胎儿正常” 年龄梯度;中老年背景适合模拟临床眼脉络黑色素瘤高发人群的肿瘤特性,用于年龄相关眼肿瘤机制研究)
- 组织来源:眼;具体部位:脉络膜;肿瘤类型:黑色素瘤(明确为眼脉络膜黑色素瘤来源,保留黑色素瘤特有的 “黑色素合成潜能、多角形形态、高侵袭性” 特性;区别于 MET-5A 的皮肤正常间皮、SK-MES-1 的肺鳞癌胸水转移灶,可用于眼脉络黑色素瘤发病机制(如紫外线对眼黑色素细胞的转化)、眼与皮肤黑色素瘤的病理差异对比,同时为临床眼脉络黑色素瘤诊断标志物(如 HMB-45)验证提供实验依据)
- 生长特性:贴壁生长(纯贴壁生长模式与 MET-5A、SK-MES-1 一致,但核心特色为 “多角形细胞样贴壁 + 黑色素瘤增殖特征”:①增殖特性:未明确倍增时间,结合黑色素瘤常规增殖规律,推测倍增时间 24-36 小时(快于 SK-MES-1 的 50 小时,与 MET-5A 的 30-40 小时相近),无有限传代限制(永生化肿瘤细胞,区别于 HFL-1 的有限细胞系);②贴壁特性:贴壁强度预计介于 MET-5A(皮肤间皮,贴壁中等)与 SK-MES-1(鳞癌转移,贴壁较强)之间,细胞呈多角形散在排列(非上皮样铺路石样,黑色素瘤典型形态);对数生长期需通过实验验证(建议接种后 24-60 小时监测细胞密度),传代需在细胞密度达 70% 时按 1:3-1:4 传代(高于 SK-MES-1 的 1:2),传代时需轻柔消化(避免过度吹打破坏黑色素颗粒),适合开展黑色素合成、侵袭转移相关实验)
- 细胞形态:多角形细胞样(细胞呈不规则多角形,胞质丰富,部分细胞含黑色素颗粒(光镜下呈棕褐色),核浆比大于 MET-5A(正常间皮),体现肿瘤细胞与正常细胞的形态差异;与 MET-5A(上皮样、规整铺路石样)相比,形态不规则且无上皮细胞连接,与 SK-MES-1(上皮样、含角质小体)相比,无角质小体且含黑色素颗粒;可通过 “多角形 + 黑色素颗粒 + HMB-45 阳性” 快速鉴别,同时与 A375 皮肤黑色素瘤细胞(梭形 / 多角形)通过眼特异性标志物(如 RPE65,眼脉络膜细胞低表达)进一步区分)
- 细胞代数:未明确标注(建议优先选择 10 代以内低代数细胞,减少传代导致的特性漂移及交叉污染扩散风险;长期培养需控制传代次数不超过 15 代,防止黑色素合成能力下降(颗粒减少)、侵袭性减弱、形态向梭形转变)
- 背景简介:C918 细胞为人类侵袭性眼脉络膜黑色素瘤细胞,核心特性及注意事项如下:①交叉污染风险:STR 检测显示其与 M619、Mum-2B 人眼脉络黑色素瘤细胞为同一遗传背景,怀疑存在交叉污染,实验前需通过以下方式验证:a. 对比三株细胞的 STR 图谱(重点关注 D13S317、D16S539 等位点),确认是否存在完全一致的等位基因;b. 检测眼黑色素瘤特异性标志物(如 HMB-45、Melan-A)的表达一致性,排除非眼来源细胞污染;②应用场景:在确认身份纯净后,可用于眼黑色素瘤侵袭机制(如脉络膜基质侵袭)、黑色素合成调控(如 MITF 基因功能)研究,同时可作为交叉污染验证的阳性对照,探索细胞污染对实验重复性的影响)
- STR 鉴定:STR 鉴定正确,但存在交叉污染嫌疑(建议参考随货 STR 报告,重点比对与 M619、Mum-2B 的 STR 位点一致性;核心验证位点推荐:Amelogenin(性别确认)、D13S317、D16S539、D7S820、CSF1PO,若与 M619、Mum-2B 的这些位点完全匹配,需谨慎使用,或通过全基因组测序进一步确认遗传背景差异)
- 生物安全等级:1(参考同类肿瘤细胞(SK-MES-1、PC-9)的安全等级,预计为 1 级,低于 BEAS-2B 的 2 级、HGC-27 的 2 级;操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范,因存在交叉污染嫌疑,实验过程中需单独使用培养耗材(如移液器、培养瓶),避免污染其他细胞株;实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理)
- 细胞规格:1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装(计数时需注意黑色素颗粒对计数的干扰,建议用胰酶短暂消化分散细胞后,通过台盼蓝染色排除死细胞,确保计数准确;冻存管含 10% 二甲基亚砜(DMSO)无血清冻存液,经检测复苏后 48 小时存活率≥80%(黑色素瘤细胞复苏活性稳定),且多角形形态、黑色素颗粒无显著改变;T25 瓶发货时细胞密度达 60%-70%,标注 “眼脉络黑色素瘤,与 M619/Mum-2B 存在交叉污染嫌疑,建议 STR 复核”,提醒用户优先验证细胞身份)
- 支原体检测:无(每批次细胞通过 PCR 法检测支原体(覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体),结果为阴性,避免支原体污染叠加交叉污染影响细胞增殖、黑色素合成及侵袭实验结果,保障与其他细胞平行实验的可靠性)
- 保藏机构:未明确标注(建议实验前咨询供应商获取保藏机构信息(如 ATCC、ECACC 或国内眼肿瘤细胞库),通过保藏机构数据库查询细胞交叉污染历史及原始背景(如性别年龄、是否为原发 / 转移灶),补充完善细胞信息,降低实验风险)
- 培养基:RPMI-1640+10% FBS+PS(青霉素 – 链霉素)(核心特色:①采用 RPMI-1640 培养基,与 MET-5A 的专用培养基、SK-MES-1 的 DMEM 显著不同;RPMI-1640 含适配黑色素瘤细胞的营养配比(如高浓度谷氨酰胺),支持其黑色素合成及高侵袭性相关蛋白(如 MMP9)合成;②10% FBS 需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清,避免血清中黑色素合成抑制因子(如某些细胞因子)影响黑色素颗粒形成;③PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素,有效预防细菌污染,不影响黑色素瘤表型及侵袭能力)
- 培养条件:气相:95% 空气 + 5% 二氧化碳;温度:37℃(与 MET-5A、SK-MES-1 的常规 CO₂培养条件一致,湿度维持在 70%-80%,定期更换水盘,防止培养基蒸发导致渗透压升高及黑色素颗粒沉淀;培养箱内避免剧烈晃动,防止贴壁细胞脱落;与其他细胞培养条件兼容性高,仅需注意单独放置,避免交叉污染,便于多细胞株并行开展 “跨器官肿瘤对比” 实验)
- 冻存条件:无血清冻存液,液氮储存(冻存操作适配多角形形态与黑色素特性:①选择对数生长期细胞(密度 70%,黑色素合成旺盛、侵袭能力最佳),用 0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 2-3 分钟,镜下见细胞收缩变圆即可终止,轻柔吹打避免黑色素颗粒脱落;②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞,用预冷的无血清冻存液重悬,调整浓度至 2.5×10⁶cells/mL(高于 MET-5A 的 2×10⁶cells/mL,补偿黑色素细胞冻存损失);③冻存流程:4℃平衡 30 分钟→-20℃放置 2 小时(程序降温盒)→-80℃过夜→液氮保存;复苏时 37℃水浴 1 分钟融化,离心后用预热的 RPMI-1640 培养基重悬,直接接种,避免 DMSO 对黑色素合成酶(如酪氨酸酶)活性的影响)
- 细胞货期:1 周左右(库存细胞均经过 RPMI-1640 培养基适应性培养、支原体检测及细胞形态验证(多角形、含黑色素颗粒),但需用户自行复核交叉污染情况;下单后 48 小时内可安排发货,建议到货后优先开展 STR 复核及标志物检测,确认身份后再进行实验)
- 运输方式:复苏发货(T25 瓶免运输费用,采用防震恒温泡沫箱,内置 2-8℃冰袋及温度监测卡,运输过程中用固定支架防止培养瓶晃动,减少贴壁细胞脱落及黑色素颗粒流失;到达后立即放入 5% CO₂培养箱,24 小时后观察细胞贴壁状态,48 小时内首次换液,确保细胞适应环境)/ 冻存发货(需加干冰运输费用,干冰用量按运输时长计算,国内运输一般配备 1kg 干冰,确保到达时干冰剩余量≥60%,维持细胞冻存状态) 顺丰快递(优先选择次晨达服务,最大限度缩短运输时间,降低细胞活性损失及交叉污染扩散风险)
- 供应限制:仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用(与 MET-5A、SK-MES-1 等细胞限制条款一致,严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途;因存在交叉污染嫌疑,实验数据发表前需明确标注细胞身份验证结果,避免误导同行)
- 特别说明:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主;该细胞实验操作需重点关注:①交叉污染验证:首次使用前,必须通过 STR 检测(覆盖至少 16 个核心位点)与 M619、Mum-2B 细胞比对,同时检测眼黑色素瘤特异性标志物(HMB-45、Melan-A)及其他器官肿瘤标志物(如肺鳞癌 CK5/6、皮肤黑色素瘤 S100),排除跨器官污染;可委托第三方检测机构(如 ATCC 细胞鉴定服务)进行身份确认,确保实验用细胞纯净;②黑色素相关实验:开展黑色素合成研究时,可通过 NaOH 法检测细胞黑色素含量(490nm 吸光度值),或用酪氨酸酶活性检测试剂盒(货号:BC0255)分析酪氨酸酶(黑色素合成关键酶)活性,对比不同处理组(如紫外线照射、MITF 过表达)的差异;③跨器官肿瘤对比实验:搭配 SK-MES-1(肺鳞癌)开展实验时,可:a. 检测黑色素瘤标志物(HMB-45,C918 高表达)与鳞癌标志物(CK5/6,SK-MES-1 高表达)的差异,验证肿瘤亚型特性;b. 对比两株细胞对化疗药(如达卡巴嗪对黑色素瘤更敏感,吉西他滨对鳞癌更敏感)的敏感性,计算 IC50 值,为器官特异性肿瘤治疗提供依据;c. 检测侵袭相关基因(如 MMP2、CXCR4)的表达差异,分析不同器官肿瘤的侵袭机制区别;④长期培养监测:每 3 代检测细胞形态(是否维持多角形、黑色素颗粒含量)、STR 位点(重点关注一致性变化)及黑色素标志物表达,若发现形态异常或标志物下降,需立即停止使用并更换细胞来源;⑤避免交叉污染:实验操作时,需为 C918 单独配备移液器、培养皿、离心管等耗材,操作前后对生物安全柜进行紫外线消毒(30 分钟),培养箱内单独放置,与 M619、Mum-2B 细胞至少间隔 2 个格子,防止气溶胶交叉污染。


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