一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间 32 小时（增殖速度快）；免疫组化显示 CK7、CK19（上皮标志物）、E – 钙黏蛋白阳性，Vimentin 弱阳性，CEA 灶性表达，Ki-67 表达率 35%（增殖活性较强）
• 功能特性：悬浮培养可高效形成肿瘤球体（随培养时间增大）；Transwell 实验显示 24 小时迁移细胞数 9.33±0.47、侵袭细胞数 3.33±0.47，48 小时分别达 195.67±2.49、186±4.90
• 致瘤性：NXG 小鼠皮下接种成瘤率 80%，肝肺无转移灶
• 核型特征：亚四倍体异常核型，染色体数目与形态差异显著，典型核型为 98，XXXX del (4) p (12) del (5) p (21) der (10)
• 药物敏感性：对奥沙利铂耐药（IC50=10.65µmol/L），对 5 – 氟尿嘧啶（IC50=0.50µmol/L）、吉西他滨（IC50=0.0035µmol/L）、紫杉醇（IC50=0.55µg/mL）敏感

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞增殖、肿瘤球形成及药物敏感性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点应对快增殖与无接触抑制）

• 当细胞密度达 50%-60% 时立即传代（倍增快且无接触抑制，密度超 70% 易密集堆叠），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免损伤多核 / 巨核细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、多边形略变圆（约 1.5-2.5 分钟，增殖快导致消化速度快，需高频观察）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少巨核细胞破碎），按 1:5-1:6 比例接种到新培养瓶（扩大传代比例控制增殖速度），维持其迁移侵袭能力与药物敏感性。

2. 换液操作

• 每 1 天更换 1 次新鲜培养基（代谢旺盛，需及时补充营养），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 若开展药物敏感性实验（如吉西他滨药效检测），换液后需稳定培养 24 小时再加药，避免换液应激干扰实验结果。

3. 肿瘤球培养与 Transwell 实验操作（专项）

（1）肿瘤球培养

• 收集对数期细胞，用无血清培养基洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用无血清肿瘤球培养基重悬细胞至 7×10⁴cells/mL。
• 接种到超低附着培养板，每孔 1mL，静置培养；培养第 2 天补加 500μL 无血清培养基，第 5-6 天可观察到明显增大的肿瘤球体。

（2）Transwell 迁移 / 侵袭实验

• 迁移实验：收集对数期细胞，用无血清 1640 培养基重悬至 5×10⁵cells/mL，上室加 200μL 细胞悬液，下室加 600μL 含 10% FBS 的 1640 培养基，培养 24-48 小时后计数。
• 侵袭实验：提前用 Matrigel™包被 Transwell 小室，其余操作同迁移实验，确保细胞侵袭能力检测准确性。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、多边形形态占比正常、多核 / 巨核细胞比例稳定、密度未超 60%）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对亚四倍体细胞的损伤，保留肿瘤球形成能力。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 12 小时观察贴壁情况，24 小时后按常规换液，因增殖快需及时控密度。