一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：H22-NLUC-puro 小鼠肝癌细胞 – NLUC 标记 – puro 抗性（NLUC 为纳米荧光素酶，具有高灵敏度、低背景信号优势）
种属来源：小鼠
组织来源：肝；肝癌
生长特性：悬浮生长（无需贴壁，需重点关注细胞密度与营养供给）
细胞形态：淋巴母细胞样
特别提醒：细胞对接种密度要求高，需保证营养充足；若培养液颜色变黄（营养耗尽），细胞易死亡，需及时换液或传代
puro 药筛浓度：该细胞 puro（嘌呤霉素）药筛浓度为 1.0μg/ml，用于去除未转染细胞；培养过程中建议使用 0.5μg/ml puro 维持，保障 NLUC 基因稳定表达
细胞代数：10 代以内（低传代，更好维持纳米荧光素酶（NLUC）活性及肝癌细胞生物学特性）
细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装
支原体检测：无（无支原体污染，避免干扰细胞悬浮增殖、NLUC 活性及肝癌相关实验结果，保障数据准确性）
背景介绍
H22-NLUC-puro 细胞是在 H22 小鼠肝癌细胞基础上稳定表达纳米荧光素酶（NLUC）并携带 puro 抗性构建而成，性状稳定。该细胞为悬浮生长的肝癌细胞，保留 H22 细胞核心特性（如恶性增殖、易在小鼠体内成瘤），叠加 NLUC 标记后，可通过高灵敏度荧光信号实时追踪肿瘤动态，适用于肝癌体内外实验，如体外药物敏感性筛选、体内皮下成瘤 / 肝转移模型的活体成像，是研究肝癌发病机制、抗肿瘤药物评估的专用细胞株。
验证核心
- NLUC 活性：通过检测报告确认荧光信号稳定且可量化，满足体内外成像对信号强度与稳定性的需求；
- 悬浮适应性：验证细胞呈单个或松散聚集悬浮状态，无明显贴壁或结块，且在适宜密度下可正常增殖，符合悬浮肝癌细胞生长特性。
细胞培养核心信息
基础参数
保藏机构：未明确标注，可通过随货产品说明书或供应商获取详细溯源信息，确保细胞株稳定性、NLUC 表达特性及小鼠肝癌细胞属性可靠。
培养与冻存
培养基配方
RPMI-1640 培养基 + 10% FBS（胎牛血清） + PS（青霉素 – 链霉素双抗）；药筛或维持 NLUC 稳定表达时，需额外添加对应浓度 puro（药筛 1.0μg/ml，维持 0.5μg/ml），适配悬浮生长的肝癌细胞营养需求，无需额外添加特殊因子。
培养条件
气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（常规 CO₂培养环境即可，需确保培养箱湿度稳定在 90% 左右，避免培养基过快蒸发导致细胞浓度异常或营养失衡）；
操作注意事项（针对悬浮生长与高营养需求特性）
- 密度严格控制：
- 适宜密度范围：1×10⁵-8×10⁵cells/mL（密度低于 1×10⁵cells/mL 易生长缓慢，高于 8×10⁵cells/mL 易营养不足导致死亡）；
- 每日观察密度：可通过细胞计数板或全自动细胞计数仪监测，密度达上限时按 1:3-1:4 比例用新鲜培养基稀释传代。
- 及时换液：
- 换液频率：每 1-2 天更换一次新鲜培养基（因细胞营养消耗快，需比普通悬浮细胞更频繁）；
- 换液方法：1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，弃去上清（含代谢废物），用新鲜培养基重悬后放回培养箱，避免直接倾倒导致细胞丢失。
- NLUC 保护：NLUC 对光稳定性较好，但仍建议避免长时间强光直射培养瓶，减少潜在荧光信号损耗；
- 避免剧烈操作：传代或换液时轻柔吹打细胞，避免剧烈摇晃或反复吹打导致细胞损伤，影响增殖与 NLUC 活性。
冻存与复苏（悬浮细胞专用流程）
- 冻存液：无血清冻存液；
- 冻存要点：选择对数生长期细胞（密度约 6×10⁵-8×10⁵cells/mL，NLUC 活性稳定），1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用新鲜培养基清洗 1 次后，用冻存液重悬，调整细胞密度至 2×10⁶-5×10⁶cells/mL；梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮长期保存），避免降温过快损伤细胞；
- 复苏要点：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴快速融化（约 1-2 分钟，避免反复冻融）；1000rpm 离心 5 分钟弃冻存液，用预热至 37℃的新鲜培养基重悬细胞（初始密度建议调整为 2×10⁵cells/mL，保障营养充足）；复苏后 24 小时观察细胞存活率（台盼蓝染色检测，存活率需≥80%），后续通过 Luciferase 检测确认 NLUC 活性。
货期与发货
细胞货期：现货，1 周左右；
发货方式：复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；
运输注意事项：复苏发货时，使用防震包装减少运输过程中的剧烈晃动，避免悬浮细胞因震荡聚集或营养失衡；冻存发货需确保干冰量充足，维持细胞冻存状态，保障接收后细胞活性与 NLUC 表达特性。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；开展肝癌相关实验时，需严格遵循 “高营养需求” 与 “密度控制” 要求，避免因操作不当导致细胞死亡；利用 NLUC 高灵敏度特性，可构建小鼠肝转移模型，通过活体成像动态监测肿瘤生长与药物干预效果，提升实验数据的临床相关性。
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