一、细胞基本属性(客服:小烽:18030101858)
细胞名称:HEPG2-NTCP-puro 人肝癌细胞 (NTCP 稳转,NTCP 为钠 – 牛磺胆酸共转运多肽,是乙肝病毒感染的关键受体)
种属来源:人
组织来源:肝脏
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
细胞代数:10 代以内(低传代,更好维持 NTCP 稳定表达及肝癌细胞生物学特性)
puro 药筛浓度:该细胞 puro(嘌呤霉素)药筛浓度为 2.0μg/ml,用于去除未稳转 NTCP 的细胞;培养过程中建议使用 1.0μg/ml puro 维持,保障 NTCP 基因稳定表达
细胞规格:1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装
支原体检测:无(无支原体污染,避免干扰细胞增殖、NTCP 表达及实验结果,保障数据准确性)
背景介绍
HEPG2-NTCP-puro 细胞是在 HEPG2 人肝癌细胞基础上,通过稳转钠 – 牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)构建而成。NTCP 是乙肝病毒(HBV)及丁肝病毒(HDV)入侵肝细胞的关键受体,因此该细胞可模拟乙肝病毒感染肝细胞的过程,适用于乙肝病毒感染机制研究、抗乙肝病毒药物筛选(如抑制病毒入侵、复制的药物评估)、病毒与宿主相互作用研究等,是肝病病毒领域的专用细胞株。
细胞培养核心信息
基础参数
保藏机构:未明确标注,可通过随货产品说明书或供应商获取详细溯源信息,确保细胞株稳定性、NTCP 稳转特性及人肝癌细胞属性可靠。
培养与冻存
培养基配方
DMEM 培养基 + 10% FBS(胎牛血清) + PS(青霉素 – 链霉素双抗);药筛或维持 NTCP 稳定表达时,需额外添加对应浓度 puro(药筛 2.0μg/ml,维持 1.0μg/ml),适配贴壁生长的肝癌细胞营养需求,无需额外添加特殊因子。
培养条件
气相:95% 空气 + 5% 二氧化碳;温度:37℃(常规 CO₂培养环境即可,无需特殊调整,需确保培养箱温度、湿度稳定,避免环境波动影响 NTCP 表达);
操作注意事项
- 传代操作:用胰酶温和消化贴壁细胞,待上皮细胞样形态边缘收缩、间隙增大后,立即加含 1.0μg/ml puro 的培养基终止消化,避免过度消化损伤细胞;
- 密度控制:定期观察细胞密度,待密度达 70%-80% 时及时传代,防止过度密集导致细胞凋亡或 NTCP 表达量下降;
- 药物实验适配:用于抗乙肝病毒药物筛选时,建议先通过 qPCR/western blot 确认 NTCP 表达正常,再进行病毒感染操作,提升实验重复性;
- 避免频繁换液:换液频率约 2-3 天 / 次,根据培养基颜色(变黄前)及时更换,避免频繁操作干扰细胞生长与 NTCP 表达。
冻存与复苏
- 冻存液:无血清冻存液;
- 冻存要点:冻存前确保细胞处于对数生长期(NTCP 表达稳定),胰酶消化收集细胞后,用含 1.0μg/ml puro 的培养基清洗 1 次,再用冻存液重悬,调整细胞密度至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml;梯度降温(4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮长期保存),避免降温过快损伤细胞;
- 复苏要点:从液氮取出冻存管后,立即放入 37℃水浴融化(约 1-2 分钟),1000rpm 离心 5 分钟弃冻存液,用含 1.0μg/ml puro 的新鲜培养基重悬;复苏后优先观察细胞贴壁情况、上皮细胞样形态,后续可通过 qPCR/western blot 确认 NTCP 稳转状态是否正常。
货期与发货
细胞货期:现货,1 周左右;
发货方式:复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用),顺丰快递;
运输注意事项:复苏细胞运输时用防震包装减少颠簸,降低贴壁细胞脱落概率;冻存发货需确保干冰量充足,维持细胞冻存状态,保障接收后细胞活性与 NTCP 稳转特性。
供应限制
仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用;因涉及病毒感染相关研究,需严格遵循生物安全规范操作,避免病毒扩散风险。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主;开展乙肝病毒相关实验时,可利用其 NTCP 稳转特性,优化病毒感染条件(如病毒滴度、感染时间),通过检测病毒复制标志物(如 HBsAg、HBV DNA)评估药物效果,为抗乙肝病毒药物研发提供可靠实验模型。


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