一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
- 细胞名称：HFL-1 人胚肺成纤维细胞（STR 鉴定正确）（与 Calu-3（25 岁成人肺腺癌转移、上皮样）、A549（58 岁成人肺腺癌原发、上皮样）同属肺来源细胞，区别于 BEAS-2B（成人正常支气管上皮）、SW620（结直肠转移），核心特色为 “胎儿男性肺来源 + 成纤维细胞样 + 有限细胞系 + 核型正常”，是肺癌微环境研究、肺发育机制、正常 – 肿瘤细胞功能对比的关键正常对照模型；可与 Calu-3（肺癌转移）、A549（肺癌原发）、BEAS-2B（成人正常支气管）组成 “肺细胞 – 正常 / 肿瘤（成纤维 / 上皮）+ 年龄梯度（胎儿→成人）+ 原发 / 转移” 体系，探索肺肿瘤发生发展中微环境（成纤维细胞）的作用，同时因有限细胞系特性，可用于肺发育相关的短期实验研究）
- 细胞别称：HFL-1; HFL 1; Human fetal lung fibroblast 1; HFL；人胚肺成纤维细胞（别称以 “HFL-1” 为核心，“Human fetal lung fibroblast 1” 明确标注 “人胚肺成纤维” 属性，与 “Calu”“A549” 等肺癌细胞前缀形成清晰区分；大小写、空格差异为常见书写变体，统一标注便于实验记录检索；“人胚肺成纤维细胞” 精准定位 “胚胎来源 + 肺器官 + 成纤维细胞类型”，避免与肺上皮细胞（如 BEAS-2B）、肺癌细胞（如 Calu-3）混淆，贴合 “正常肺细胞 + 字母数字 + 细胞类型” 的命名体系）
- 种属来源：人
- 性别年龄：男；胎儿（明确的男性胎儿背景，填补肺细胞模型中 “胚胎期正常成纤维细胞” 空白，与 Calu-3（25 岁男成人）形成 “胎儿 – 成人” 年龄对照，与 A549（58 岁男成人）形成 “胎儿 – 中老年” 年龄梯度，与 HT-29（44 岁女成人）形成 “胎儿男 – 成人女” 性别年龄双重对比；胎儿阶段肺组织处于发育中，细胞具备较强增殖分化潜能，可用于肺发育机制研究、胚胎期与成人期肺细胞功能差异研究，适合模拟胚胎期肺微环境的研究场景）
- 组织来源：肺（明确为胎儿肺组织来源，保留胚胎肺成纤维细胞特有的 “增殖活跃、分泌肺发育相关因子、核型正常” 特性；区别于 Calu-3 的肺腺癌胸水转移灶、A549 的肺腺癌原发灶，可用于肺癌微环境研究（如成纤维细胞与肺癌细胞的相互作用）、肺胚胎发育相关因子（如 FGF、TGF-β）功能研究，同时为临床肺癌微环境靶向治疗提供正常对照依据）
- 生长特性：贴壁生长（纯贴壁生长模式与 Calu-3、A549 一致，但核心特色为 “成纤维细胞特有的贴壁形态 + 有限增殖”：①增殖特性：作为有限细胞系，传代次数有限（通常不超过 30 代，远少于癌细胞的无限传代），10 代以内细胞增殖活跃（倍增时间推测 24-36 小时，快于 Calu-3 的 35-45 小时，慢于 A549 的 22 小时）；②贴壁特性：贴壁强度高于 Calu-3（肺癌转移细胞）、与 A549（肺癌原发细胞）相近，细胞呈放射状或梭形分布（非上皮细胞的铺路石样）；对数生长期为接种后 24-72 小时，传代需每 24 小时镜检 1 次，待密度达 80% 时按 1:3-1:4 传代（高于 Calu-3 的 1:2），传代时需避免过度消化（防止细胞损伤影响有限传代潜能），适合开展肺微环境共培养、细胞增殖分化相关实验）
- 细胞形态：成纤维细胞样（细胞呈长梭形或星形，胞质伸展呈纤维状，核呈椭圆形（位于细胞中央），无上皮细胞特有的分泌颗粒；与 Calu-3（上皮样、易成团）相比，形态为典型成纤维细胞特征，无成团现象，与 A549（上皮样、排列紧密）相比，细胞间隙更大、呈放射状排列；可通过 “梭形 + 成纤维细胞样” 形态快速鉴别，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞（上皮样）通过成纤维细胞特异性标志物（如 vimentin 高表达、CK 低表达）进一步区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “胚胎期特性、核型正常、增殖活跃” 核心特征，建议传代次数严格控制在 10 代以内（少于 Calu-3 的 10 代建议值，因有限细胞系易衰老），防止长期传代导致特性漂移，如增殖速度减慢（＞48 小时）、细胞形态向衰老型（扁平宽大）转变、分泌功能下降）
- 背景介绍：HFL-1 细胞为正常胎儿肺成纤维细胞，核心特性及应用如下：①正常与有限特性：核型正常（无染色体易位、异倍体），区别于 Calu-3 的染色体异常，是肺癌研究的理想正常对照；作为有限细胞系，模拟体内正常成纤维细胞的增殖潜能，避免永生化细胞的人工特性干扰；②功能特色：可分泌肺发育相关细胞因子（如 FGF-7、TGF-β1）、 extracellular matrix（ECM）成分（如胶原、纤连蛋白），参与肺微环境构建；③应用场景：广泛用于肺癌微环境研究（如与 Calu-3 共培养探索成纤维细胞对肿瘤转移的影响）、肺胚胎发育机制（如细胞因子调控肺组织分化）、正常 – 肿瘤细胞功能对比（如增殖、分泌差异），同时可作为药物毒性检测的正常细胞模型（评估药物对正常肺细胞的影响））
- STR 位点信息：Amelogenin:X（与男性性别标注矛盾，推测为 STR 检测时 Y 染色体信号弱或胎儿期染色体未完全发育成熟导致，建议实验前通过 SRY 基因 PCR 验证性别，避免影响男性胚胎相关实验（如雄激素对肺发育的影响））; CSF1PO:10（纯合子）；D13S317:8（纯合子，与 Calu-3 的 12 纯合子差异显著）；D16S539:9,11；D18S51:15（纯合子）；D21S11:31.2,32.2；D3S1358:15,17（与 Calu-3 的 15,18 差异）；D5S818:11,12；D7S820:11（纯合子）；D8S1179:12,14；FGA:21,24；PentaD:9,14（额外检测位点，区别于肺癌细胞）；PentaE:21（额外检测位点）；TH01:6,9；TPOX:8（纯合子）；vWA:16（纯合子）；（STR 位点含额外 PentaD/PentaE 位点、多个纯合子，与 Calu-3、A549 的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与 ATCC CCL-153 数据比对，确认细胞身份及正常成纤维属性）
- 生物安全等级：1（与 Calu-3、A549、BEAS-2B 的安全等级一致，低于 HGC-27（等级 2）、WPMY-1（等级 2），操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范，因是正常细胞，实验废弃物处理可按常规生物安全一级标准（121℃高压灭菌 30 分钟），无需额外特殊防护）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（计数时成纤维细胞呈梭形，需轻柔吹打避免细胞断裂，确保计数准确；冻存管含 10% 二甲基亚砜（DMSO）无血清冻存液，经检测复苏后 48 小时存活率≥85%（胚胎细胞复苏活性高），且成纤维形态、核型正常特性无显著改变；T25 瓶发货时细胞密度达 70%-80%（高于 Calu-3 的 50%-60%），标注 “有限细胞系，建议 10 代内使用”，提醒用户关注传代限制）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响细胞增殖、分泌功能及核型稳定性，保障与 Calu-3、A549 平行实验（如共培养）的可靠性）
- 保藏机构：ATCC; CCL-153，BCRC; 60299，ECACC; 89071902；中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（国际权威机构（ATCC、ECACC）、地区性机构（BCRC）与国内顶尖机构三重保藏，细胞来源可追溯性极强，胎儿肺成纤维特性、核型正常及有限细胞系属性经过严格验证，与 Calu-3（双机构保藏）的保藏体系互补，便于国内外科研机构协作及文献结果复现）
- 培养基：F12K+10% FBS+PS（青霉素 – 链霉素）（核心特色：①采用 F12K 培养基，与 Calu-3 的 MEM、A549 的 DMEM 显著不同；F12K 含丰富氨基酸、维生素及微量元素，适配胚胎肺成纤维细胞的高代谢需求，支持其增殖及分泌肺发育相关因子；②10% FBS 需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清，避免血清中衰老因子加速有限细胞系衰老；③PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响细胞分泌功能及核型）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（与 Calu-3、A549 的常规 CO₂培养条件一致，湿度维持在 70%-80%，定期更换水盘，防止培养基蒸发导致渗透压升高；培养箱内避免剧烈晃动，防止成纤维细胞伸展的胞质断裂；与其他肺细胞培养条件完全一致，无需特殊调整，便于多细胞株并行开展 “正常 – 肿瘤” 对比实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配成纤维细胞特性与有限细胞系属性：①选择对数生长期细胞（密度 80%，增殖活性最佳），用 0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 2-3 分钟（短于 Calu-3 的 4-5 分钟，因成纤维细胞贴壁强度略低），镜下见细胞收缩变圆即可终止，轻柔吹打避免胞质断裂；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 2×10⁶cells/mL（低于 Calu-3 的 3×10⁶cells/mL，因胚胎细胞复苏存活率高）；③冻存流程：4℃平衡 30 分钟→-20℃放置 2 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1 分钟融化，离心后用预热的 F12K 培养基重悬，直接接种，避免 DMSO 对胚胎细胞增殖潜能的影响）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过 F12K 培养基适应性培养、核型验证（正常二倍体）及成纤维标志物检测（vimentin 阳性），确保核心特性稳定；下单后 48 小时内可安排发货，可与 Calu-3（1 周货期）同步下单，保障 “正常 – 肿瘤” 平行实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中用固定支架防止培养瓶晃动，减少成纤维细胞胞质断裂；到达后立即放入 5% CO₂培养箱，24 小时后观察细胞状态，48 小时内首次换液，确保细胞快速适应环境）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，国内运输一般配备 1kg 干冰，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，最大限度缩短运输时间，降低细胞活性损失及有限细胞系特性改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 Calu-3、A549 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；因是正常胎儿细胞，需遵守胚胎来源细胞的伦理使用规范，实验前需提交伦理审查备案，确保合规使用）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①有限细胞系管理：严格控制传代次数（10 代以内），每代记录传代时间、细胞密度，避免过度传代导致衰老；建议每 5 代冻存 1 批种子细胞（液氮保存），确保后续实验有低代数细胞可用；②成纤维细胞特性应用：开展肺癌微环境共培养实验时，可将 HFL-1 与 Calu-3 按 1:1 比例接种于 Transwell 共培养板（HFL-1 在下室，Calu-3 在上室），培养 48-72 小时后检测 Calu-3 的侵袭能力（Transwell 穿膜实验）及 HFL-1 的细胞因子分泌（如 TGF-β1，ELISA 检测），分析成纤维细胞对肺癌转移的影响；③正常 – 肿瘤对比实验：搭配 Calu-3 开展实验时，可：a. 检测增殖相关基因（如 Ki67，HFL-1 在 10 代内高表达，Calu-3 因慢增殖表达较低）、成纤维标志物（vimentin，HFL-1 高表达，Calu-3 低表达）的差异，验证细胞类型特性；b. 对比两株细胞对化疗药（如顺铂）的 IC50 值（HFL-1 作为正常细胞 IC50 更低，对药物更敏感），评估药物对正常细胞的毒性；c. 检测肺发育相关因子（如 FGF-7，HFL-1 高表达，Calu-3 低表达）的差异，分析胚胎期与肿瘤期肺细胞的功能区别；④核型检测：每 5 代通过染色体核型分析（常规 G 带染色）验证核型正常（46,XY），排除长期传代导致的染色体异常，确保正常细胞属性；⑤培养基适配性：若实验室无 F12K 培养基，可尝试用 DMEM/F12（1:1）培养基替代，但需提前进行适应性培养（传代 2 次），并检测细胞增殖速度、vimentin 表达，确保特性无显著改变。
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