一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间 48 小时，免疫组化显示 CK7、CK19（胆道上皮标志物）、E – 钙黏蛋白、波形蛋白阳性，Ki-67 表达率 40%（增殖活性较强），克隆形成能力强
• 功能特性：超低附着条件下可形成结构良好的肿瘤球体；基质中可从微小颗粒发育为球状 / 囊状类器官
• 致瘤性：BALB/c 裸鼠皮下接种成瘤率 100%，移植瘤呈尖刺状且浸润性强，4 周直径近 1cm，肝肺无转移灶
• 核型特征：均为亚四倍体异常核型，染色体数目与形态差异显著，典型核型为 77，XXX der (1) der (7) der (8) del (9) q（21）
• 药物敏感性：对奥沙利铂（IC50=2.9µmol/L）、紫杉醇（IC50=7.3ng/mL）敏感，对吉西他滨（IC50>60µmol/L）、5 – 氟尿嘧啶（IC50=176.9µmol/L）天然耐药

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞增殖、耐药性及类器官形成能力）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点应对无接触抑制与高代谢特性）

• 当细胞密度达 60%-70% 时立即传代（无接触抑制且代谢旺盛，密度超 80% 易堆叠影响活性），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免损伤纺锤形细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、纺锤形略变圆（约 2-3 分钟，代谢快导致消化速度中等，需逐瓶观察）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少细胞破碎），按 1:4-1:5 比例接种到新培养瓶（控制增殖速度），维持其克隆形成能力与药物敏感性特性。

2. 换液操作

• 每 1-2 天更换 1 次新鲜培养基（代谢旺盛，需及时补充营养），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 若开展药物敏感性实验（如奥沙利铂药效检测），换液后需稳定培养 24 小时再加药，避免换液应激干扰实验结果。

3. 肿瘤球与类器官培养操作（专项）

（1）肿瘤球培养

• 收集对数期细胞，用无血清培养基洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用无血清肿瘤球培养基重悬细胞至 6×10⁴cells/mL。
• 接种到超低附着培养板，每孔 1mL，静置培养；培养第 3 天补加 500μL 无血清培养基，第 6-7 天可观察到结构完整的肿瘤球体。

（2）类器官培养

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官基础培养基重悬细胞至 4×10⁴cells/mL，与基质胶按 1:1 比例混合。
• 接种到培养板，37℃孵育 30 分钟使基质胶凝固，再加入类器官完全培养基；每 3 天更换 1 次培养基，10-12 天可观察到球状 / 囊状类器官。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、纺锤形形态占比正常、密度未超 70%）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对亚四倍体细胞的损伤，保留类器官形成能力。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 24 小时观察贴壁情况，48 小时后按常规换液，因代谢旺盛需及时补充营养。