一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间 36 小时（增殖速度快），免疫组化显示 CK7、CK19（胆管上皮标志物）、E – 钙黏蛋白、波形蛋白、P53、Ki-67 阳性；TP53 基因存在 C→T 突变
• 功能特性：体外侵袭能力和克隆形成能力强于 RBE 细胞；无血清悬浮培养可形成胆管癌球体（提示干细胞特性），基质胶中可形成孢子样聚集体类器官（培养需 7-14 天）
• 致瘤性：BALB/C 裸鼠皮下接种成瘤率 100%，肿瘤生长迅速（4 周直径近 1cm），向周围组织浸润，肝肺无转移灶
• 核型特征：近四倍体异常核型，典型核型为 81，XXX del (6)（p21），del（12）（q23）、del (X)（q13）、+3、+ 15、+16（×3）、+mar（×7）
• 药物抗性：对吉西他滨、紫杉醇、5 – 氟尿嘧啶、奥沙利铂均呈天然耐药性（具体 IC50 值见药物敏感性试验）

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞增殖、耐药性及干细胞特性）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作（重点应对无接触抑制与快增殖特性）

• 当细胞密度达 50%-60% 时立即传代（因无接触抑制且倍增快，密度超 70% 易密集堆叠，影响细胞活性），弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免损伤纺锤形细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、纺锤形略变圆（约 1.5-2.5 分钟，增殖快导致消化速度快，需高频观察）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少细胞破碎），按 1:5-1:6 比例接种到新培养瓶（扩大传代比例以控制增殖速度），维持其侵袭能力、干细胞特性及耐药性。

2. 换液操作

• 每 1 天更换 1 次新鲜培养基（因倍增时间短、代谢极旺盛，需缩短换液间隔），换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致细胞脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 若开展 TP53 突变相关实验，换液后需稳定培养 12 小时再加药或处理，避免换液应激影响基因表达稳定性。

3. 肿瘤球与类器官培养操作（专项）

（1）肿瘤球培养

• 收集对数期细胞，用无血清培养基洗涤 2 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用无血清肿瘤球培养基重悬细胞至 5×10⁴cells/mL。
• 接种到超低附着培养板，每孔 1mL，置于培养箱静置培养；培养第 3 天补加 500μL 无血清培养基，第 5-7 天可观察到结构完整的胆管癌球体。

（2）类器官培养

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官基础培养基重悬细胞至 3×10⁴cells/mL，与基质胶按 1:1 比例混合。
• 接种到培养板，37℃孵育 30 分钟使基质胶凝固，再加入类器官完全培养基；每 3 天更换 1 次培养基，7-14 天可观察到孢子样聚集体类器官。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、纺锤形形态占比正常、密度未超 60%）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对异常核型细胞的损伤，保留干细胞特性。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 12 小时观察贴壁情况，24 小时后按常规换液，避免延误换液影响增殖。