一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：K7M2wt-FLUC-puro 小鼠骨肉瘤成骨细胞 (FLUC 标记)
细胞别称：K7M2wt-luc; 小鼠骨肉瘤成骨细胞 – 荧光素酶标记；小鼠骨肉瘤成骨细胞 – luc
种属来源：小鼠
组织来源：骨
生长特性：贴壁生长
细胞形态：成骨细胞
细胞代数：未明确标注，因荧光强度随传代减弱，建议优先选择低传代细胞（如 p3-p10），减少荧光损耗
生物安全等级：未明确标注，参考同类小鼠肿瘤细胞标准，建议按 1 级生物安全防护操作
特别注意：该细胞为稳定转染 FLUC 的细胞，荧光强度随传代增加逐渐减弱，需通过嘌呤霉素再次筛选维持；收到细胞后建议传 3 代冻存留种，再开展筛选操作；筛选浓度梯度与判断标准如下：
- 初次筛选：用含 1μg/ml 嘌呤霉素的完全培养基培养，若细胞漂浮少（≤40%），可换 2μg/ml 浓度继续；
- 梯度提升：依次尝试更高浓度，最高至 5μg/ml；
- 暂停与恢复：若漂浮细胞＞60%，立即换正常培养基，待细胞密度达 80% 后，再用同浓度嘌呤霉素筛选；
- 筛选终止：当 5μg/ml 嘌呤霉素下细胞可正常增殖，换无药培养基常规培养。
背景与筛选验证
背景介绍
- 细胞特性：表达 CD31、八因子、整合唾液酸蛋白（BSP）、biglyan、decorrin、villin 2（ezrin）等抗原，其中骨唾液酸蛋白、biglyan、decorrin 及骨桥蛋白（osteopontin）的表达，体现其骨家族细胞特性；
- 荧光标记：通过慢病毒转染携带 FLUC（荧光素酶）基因，可用于体内外荧光成像实验，适用于小鼠骨肉瘤成骨细胞相关的肿瘤生长、转移追踪及药物筛选；
- 质量控制：已通过支原体检测，确保细胞无支原体污染。
细胞培养核心信息
基础参数
细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装；
支原体检测：无（避免干扰细胞增殖、FLUC 活性及骨肉瘤相关实验结果，保障数据准确性）；
保藏机构：未明确标注，可通过随货产品说明书或供应商获取详细溯源信息，确保细胞株稳定性与小鼠骨肉瘤成骨细胞属性可靠。
培养与冻存
- 培养基配方：DMEM 培养基 + 10% FBS（胎牛血清）+1% PS（青霉素 – 链霉素双抗）；常规培养无需加药，仅荧光强度减弱时按 “特别注意” 要求添加嘌呤霉素筛选；
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（常规 CO₂培养环境即可，无需特殊调整）；
操作注意事项：
- 传代操作：用胰酶消化贴壁细胞，待细胞间隙增大、形态变圆后，立即加培养基终止消化，避免过度消化损伤细胞；
- 密度控制：定期观察细胞密度，待达 70%-80% 时及时传代，防止过度密集导致 FLUC 活性下降或细胞凋亡；
- 荧光保护：FLUC 对光敏感，避免长时间强光直射培养瓶，减少荧光信号损耗。
- 冻存条件：冻存液：无血清冻存液；
操作要点：
- 冻存时机：优先选择荧光强度稳定、低传代（如筛选后传 1-2 代）的细胞，确保冻存细胞质量；
- 密度调整：胰酶消化收集细胞，离心后用冻存液重悬，调整密度至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml；
- 梯度降温：4℃放置 30 分钟→-20℃放置 1 小时→-80℃过夜→转入液氮长期保存；
- 复苏操作：37℃水浴快速融化冻存管，离心弃冻存液，用新鲜培养基重悬，复苏后优先观察细胞贴壁情况、成骨细胞形态及 FLUC 活性。
货期与发货
细胞货期：现货，1 周左右；
发货方式：复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；运输复苏细胞时，需使用防震包装减少颠簸，降低贴壁细胞脱落概率，保障接收后细胞活性与荧光特性稳定。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；开展实验时，需重点关注荧光强度的维持的嘌呤霉素筛选流程，结合其成骨细胞特性设计骨肉瘤骨转移模型，利用 FLUC 荧光信号追踪肿瘤生长，提升实验数据的针对性与精准度。
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