一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代操作

• 常规培养（未诱导分化）时，观察细胞密度，当密度达 2×10⁶-4×10⁶cells/mL（细胞悬浮均匀，无明显沉底聚团）时，直接按 1:2-1:3 比例加入新鲜专用培养基稀释。
• 无需胰酶消化，操作时用移液器轻柔吹打 3-5 次，避免用力过猛破坏细胞形态；若需进行 TPA 诱导实验，需在传代后调整细胞密度至适宜浓度（建议 1×10⁶cells/mL 左右）再添加 TPA。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次培养基，将细胞悬液转移至离心管，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清（上清中若含实验相关因子可按需保留）。
• 用新鲜专用培养基重悬细胞沉淀，调整密度至 1×10⁶cells/mL 左右后放回培养瓶；若细胞出现少量聚团，可轻柔吹打分散，避免聚团影响营养吸收。

3. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、悬浮分散均一，未进行 TPA 诱导）的细胞悬液，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装到冻存管后，按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对白血病细胞活性的影响，保留基因突变特性。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化），避免冰晶反复冻融损伤细胞，迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的专用培养基重悬细胞后接种，24-48h 观察细胞存活状态及悬浮能力恢复；复苏后建议先常规培养 1-2 代，再进行后续实验。