一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：LN229-NLUC-bsd 人大脑神经母瘤细胞 (NLUC 标记，NLUC 为纳米荧光素酶，具有高灵敏度、低背景信号优势；标注中 “KPC cells” 应为笔误，正确为 “LN229 cells”)
种属来源：人
组织来源：脑
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
特别注意（bsd 药筛浓度）：该细胞 bsd（博来霉素抗性基因）药筛浓度为 8.0μg/ml，用于去除未转染细胞；培养过程中建议使用 4.0μg/ml bsd 维持，保障 NLUC 基因稳定表达
细胞代数：10 代以内（低传代，更好维持纳米荧光素酶（NLUC）活性及大脑神经母瘤细胞生物学特性）
细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装
支原体检测：无（无支原体污染，避免干扰细胞增殖、NLUC 活性及神经母瘤相关实验结果，保障数据准确性）
背景介绍
LN229-NLUC-bsd 细胞是在 LN229 人大脑神经母瘤细胞基础上稳定表达纳米荧光素酶（NLUC）构建而成，性状稳定。该细胞保留 LN229 细胞核心特性（典型大脑神经母瘤细胞特征，如神经源性分化潜能、侵袭性生长特性），叠加 NLUC 标记后，可通过高灵敏度荧光信号追踪肿瘤动态，适用于神经母瘤体内外实验，如体外药物筛选、体内颅内移植 / 皮下成瘤模型的活体成像，是研究神经母瘤发病机制、抗肿瘤药物评估的专用细胞株。
验证核心
- NLUC 活性：通过标准化检测（明确底物浓度、孵育时间、检测仪器），确认荧光信号稳定且可量化，满足体内外成像对信号灵敏度的需求；
- 细胞特性：低传代（10 代以内）保障细胞未发生表型漂移，维持神经母瘤细胞特有的生物学功能，确保实验结果与临床特征一致性。
细胞培养核心信息
基础参数
保藏机构：未明确标注，可通过随货产品说明书或供应商获取详细溯源信息，确保细胞株稳定性、NLUC 表达特性及人大脑神经母瘤细胞属性可靠。
培养与冻存
培养基配方（需严格遵循低血清要求）
DMEM 培养基 + 5% FBS（胎牛血清，低血清浓度为细胞生长必需，不可擅自提高至 10%，避免细胞过度增殖导致特性改变） + PS（青霉素 – 链霉素双抗）；药筛或维持 NLUC 稳定表达时，需额外添加对应浓度 bsd（药筛 8.0μg/ml，维持 4.0μg/ml），适配贴壁生长的神经母瘤细胞营养需求。
培养条件
气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（常规 CO₂培养环境即可，需确保培养箱温度、湿度稳定，避免环境波动影响 NLUC 活性及神经母瘤细胞分化状态）；
操作注意事项
- 传代操作：神经母瘤细胞贴壁较牢固，胰酶消化时间需略长（约 2-3 分钟），待上皮细胞样形态边缘收缩、间隙增大后，立即加含 4.0μg/ml bsd 的培养基终止消化，避免过度消化损伤细胞；
- 密度控制：定期观察细胞密度，待密度达 70%-80% 时及时传代，防止过度密集导致细胞堆积、NLUC 活性下降或分化异常；
- NLUC 保护：NLUC 对光稳定性较好，但仍建议避免长时间强光直射培养瓶，减少潜在荧光信号损耗；
- 培养基管理：低血清培养基营养有限，需每 2 天更换一次新鲜培养基，确保细胞获得充足营养，维持正常生长状态。
冻存与复苏
- 冻存液：无血清冻存液；
- 冻存要点：冻存前确保细胞处于对数生长期（NLUC 活性稳定、未发生分化），胰酶消化收集细胞后，用含 4.0μg/ml bsd 的培养基清洗 1 次，再用冻存液重悬，调整细胞密度至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml；梯度降温（4℃ 30 分钟→-20℃ 1 小时→-80℃过夜→液氮长期保存），避免降温过快损伤细胞；
- 复苏要点：从液氮取出冻存管后，立即放入 37℃水浴融化（约 1-2 分钟，避免反复冻融）；1000rpm 离心 5 分钟弃冻存液，用含 4.0μg/ml bsd 的新鲜低血清培养基重悬；复苏后细胞贴壁较慢，需静置 24-48h 再观察，优先确认细胞贴壁情况、上皮细胞样形态，后续可参考标准 NLUC 检测方法确认活性。
货期与运输
细胞货期：现货，1 周左右；
运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；
运输注意事项：复苏发货时，用防震包装减少颠簸，降低贴壁细胞脱落概率；冻存发货需确保干冰量充足，维持细胞冻存状态，保障接收后细胞活性、NLUC 表达及神经母瘤细胞特性稳定。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；开展神经母瘤相关实验时，可结合其颅内生长特性设计颅内移植模型，利用 NLUC 高灵敏度优势，按验证报告中的成像参数（如底物浓度、检测时间）监测肿瘤生长与药物干预效果，提升实验数据的临床相关性；同时需严格遵循低血清培养基要求，避免因血清浓度不当导致细胞特性改变，影响实验重复性。
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