一、细胞基本属性
- 细胞名称：MKN-45 人胃癌细胞（STR 鉴定正确）（与 MKN-1（35 岁女印戒细胞转移癌）同属胃印戒细胞癌亚型，区别于 MGC-803（原发低分化腺癌）、HGC-27（未分化转移癌），核心特色为 “贴壁 + 少量悬浮混合生长”“老年女性来源”，是胃癌印戒细胞癌年龄相关机制、混合生长特性研究的补充模型；可与 MKN-1（年轻女）、GES-1（正常）组成 “正常 – 年轻女性印戒癌 – 老年女性印戒癌” 年龄梯度体系，探索印戒细胞癌发病的年龄差异，同时与 MGC-803、HGC-27 构建 “不同亚型胃癌” 对比体系，验证药物对印戒细胞癌的亚型特异性效果）
- 细胞别称：MKN45；MKN-45；人胃癌细胞（别称以 “MKN” 为核心前缀，与 MKN-1（“MKN” 前缀）形成印戒细胞癌细胞株的 “MKN 系列” 关联，数字 “45” 与 MKN-1 的 “1” 形成编号区分，便于实验记录及文献检索；“人胃癌细胞” 明确标注器官与肿瘤属性，避免与其他 “MK” 前缀细胞混淆，贴合 “胃癌亚型 + 系列编号” 的精准命名体系，强化印戒细胞癌亚型的文档关联性）
- 种属来源：人
- 性别年龄：女；62 岁（明确的老年女性背景，与 MKN-1（35 岁女）形成 “老年 – 年轻” 女性年龄梯度，填补印戒细胞癌模型中老年女性来源的空白，与 MGC-803（53 岁男）形成 “老年女 – 中年男” 性别年龄对照，为胃癌印戒细胞癌年龄相关机制（如老年患者耐药性增强）、性别差异研究提供精准模型，适合模拟临床老年女性印戒细胞癌研究场景）
- 组织来源：胃（具体为胃印戒细胞癌组织，推测为淋巴结转移灶（与 MKN-1 同源建系背景一致），保留印戒细胞癌特有的 “胞质粘液充盈、核偏位” 核心表型，同时因老年来源可能具备 “更显著的染色体异常、更高耐药潜能” 特性；区别于 MKN-1 的年轻女性转移灶，可用于印戒细胞癌老年患者发病机制（如长期慢性炎症诱导癌变）、老年与年轻患者肿瘤特性差异研究，同时为临床老年印戒细胞癌治疗方案优化提供实验依据）
- 生长特性：贴壁和少量悬浮生长（核心特色为混合生长模式，贴壁细胞占比 80%-90%，少量悬浮细胞呈小团状（含 3-5 个细胞），与 MKN-1 的纯贴壁生长显著差异；对数生长期细胞增殖节奏中等（慢于 HGC-27，快于 MKN-1），贴壁强度低于 MKN-1（印戒细胞）、高于 GES-1（正常）；悬浮细胞团具备活性，传代时需同时收集贴壁与悬浮细胞，适合开展混合生长肿瘤细胞的分离培养、侵袭转移关联研究（如悬浮细胞与转移潜能的关系））
- 细胞形态：上皮细胞样（细胞呈圆形或椭圆形，胞质丰富含粘液（需 PAS 染色验证），细胞核偏位形成典型 “印戒样” 形态，与 MKN-1 的印戒形态一致；贴壁细胞排列松散，悬浮细胞呈小团状（区别于 MKN-1 的单层贴壁），无完整腺管结构；与 HGC-27（短梭形无印戒）、MGC-803（部分腺管）相比，印戒样形态是核心鉴别点，可通过 “贴壁 + 悬浮小团” 形态快速区分于 MKN-1，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞形成器官特异性区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “印戒形态、混合生长、老年来源相关特性” 核心特征，建议传代次数不超过 12 代，防止长期传代导致特性漂移，如悬浮细胞比例显著下降、印戒样形态丢失、染色体数目异常）
- 注意事项（消化与培养）：
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- 消化操作细节：因细胞易成团且吹打易产生碎片，消化需严格遵循：①胰酶提前恢复常温（避免低温刺激细胞），加入量需完全浸没细胞（确保消化均匀）；②放入 37℃培养箱孵育至少 5 分钟，期间不晃动培养瓶，镜下观察细胞间隙增大、边缘收缩，用胰酶冲洗瓶壁能轻松吹下细胞即可终止；③吹打时使用 1mL 移液器轻柔吹打（力度低于 MKN-1），避免过猛导致细胞破碎，形成的细胞碎片会附着皿底污染后续培养；
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- 悬浮细胞处理：传代或换液时，需收集上清中的悬浮细胞团，与贴壁细胞合并消化，避免悬浮细胞流失导致细胞数量不足；离心时转速控制在 800rpm（低于 MKN-1 的 1000rpm），防止悬浮细胞团破碎；
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- 培养基维护：培养过程中需保持培养基充足（T25 瓶加液 8-10mL，高于常规细胞的 5-6mL），避免培养基过少导致悬浮细胞团干涸；换液频率建议 2 天 1 次，换液时保留 1/3 旧培养基（含悬浮细胞生长所需因子），减少对混合生长平衡的干扰。
- 背景介绍：MKN-45 细胞由 S・Akiyama 建立，源于日本一位 62 岁患有印戒细胞癌的女性的胃淋巴结，核心特性及应用如下：①同源与年龄特色：与 MKN-1 同由 S・Akiyama 建系，同源背景确保印戒细胞癌亚型的一致性，同时 62 岁老年来源使其成为研究印戒细胞癌老年发病特征的专属模型，可对比分析年轻（MKN-1）与老年（MKN-45）印戒细胞癌的基因表达差异（如衰老相关基因 p16、p53）；②混合生长价值：贴壁 + 悬浮混合生长模拟体内肿瘤 “贴壁侵袭 + 脱落转移” 的动态过程，悬浮细胞团可能代表具备更高转移潜能的亚群，可用于肿瘤异质性、转移起始细胞筛选研究；③应用场景：广泛用于印戒细胞癌年龄相关机制（如老年患者化疗耐药）、混合生长特性调控（如悬浮细胞团形成机制）、药物筛选（针对老年印戒癌的温和治疗方案），同时可与 MKN-1 搭配开展 “年龄梯度” 对比实验，验证年龄对印戒细胞癌治疗响应的影响。
- STR 位点信息：Amelogenin：X（明确女性性别，与 MKN-1 的 Amelogenin：X 一致，验证细胞性别一致性，排除交叉污染，强化 “女性印戒细胞癌” 的亚型身份）; CSF1PO：12；D13S317：8，11；D16S539：10；D18S51：16；D19S433：14，16.2；D21S11：31；D2S1338：OL（等位基因缺失，印戒细胞癌染色体异常特征）；D3S1358：15，16；D5S818：10，11；D7S820：10，11；D8S1179：13，17；FGA：19，24；TH01：7；TPOX：8；vWA：19；（STR 位点含等位基因缺失（D2S1338：OL），与 MKN-1 的染色体异常特征相似，可通过图谱与保藏机构数据比对确认细胞身份，同时与 MGC-803、HGC-27 的 STR 图谱差异显著，避免细胞混淆）
- 使用权限：A 类（与 MKN-1（未明确权限）、LNCaP 等细胞权限一致，属于开放获取的科研用细胞株，无需特殊申请即可获取，便于各类科研机构开展印戒细胞癌年龄梯度、混合生长相关研究，尤其适合国内实验室开展 “MKN 系列” 细胞协作实验）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（计数时需包含贴壁细胞与悬浮细胞团（吹散后计数）；冻存管含 10% DMSO 无血清冻存液，经检测复苏后 48 小时存活率≥75%（低于 MKN-1 的 80%，因混合生长对冻存更敏感），且印戒形态、混合生长比例无显著改变；T25 瓶发货时标注 “含少量悬浮细胞”，提醒用户收集上清细胞）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响混合生长平衡及印戒形态，保障与 MKN-1 平行实验的可靠性）
- 保藏机构：中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心（国内权威机构保藏，细胞来源可追溯，印戒特性及混合生长表型经过严格验证，与 MKN-1（未明确保藏）、MGC-803（多机构保藏）的保藏体系互补，便于国内科研机构开展印戒细胞癌本土化研究）
- 培养基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S（青霉素 – 链霉素）（核心特色：①与 MKN-1 的 RPMI-1640 配方一致，区别于 HGC-27 的 DMEM；RPMI-1640 含丰富氨基酸，适配印戒细胞粘液合成需求，同时支持悬浮细胞团生长；②10% FBS 需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清，避免血清中黏附因子改变混合生长比例；③P/S 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响悬浮细胞活性）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（培养箱湿度维持在 75%-80%（高于常规细胞），减少培养基蒸发导致悬浮细胞团干涸；培养箱内避免剧烈晃动，防止贴壁细胞脱落加剧；与 MKN-1、GES-1 等所有已梳理细胞的培养条件一致，仅需适配混合生长特性调整操作，便于多细胞株并行实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配混合生长特性：①同时收集贴壁细胞（0.25% 胰酶常温孵育 5 分钟）与悬浮细胞，合并后轻柔吹散大团块（保留小团块，避免单细胞化）；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 2.5×10⁶cells/mL（高于常规细胞，补偿混合生长损失）；③冻存流程：4℃平衡 40 分钟→-20℃放置 3 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1.5 分钟融化，离心后用预热培养基重悬，直接接种）
- 染色体：67~71（染色体数目多于正常二倍体（46 条），且波动范围窄于 MKN-1（未明确），体现老年印戒细胞癌遗传背景相对稳定；染色体数目异常与印戒细胞癌恶性表型（如粘液分泌）相关，实验设计中需注意染色体倍性对药物靶点表达的影响）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过混合生长比例验证（贴壁 80%-90%、悬浮 10%-20%）及印戒形态检测，确保核心特性稳定；下单后 48 小时内安排发货，可与 MKN-1 同步下单，保障 “年龄梯度” 实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中避免颠簸，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入 37℃培养箱，36 小时内不换液，待悬浮细胞团稳定后再操作）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，缩短运输时间，降低细胞活性损失）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 MKN-1、MGC-803 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗等非科研用途；实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理，避免生物危害）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①消化操作严格执行：常温胰酶需提前 30 分钟恢复室温，加入量以完全浸没细胞为准（T25 瓶约 2mL），培养箱孵育期间不频繁观察，5 分钟后轻晃培养瓶，若细胞边缘收缩且能轻松吹下即可终止；吹打时用 1mL 移液器沿瓶壁轻柔画圈，避免用力过猛产生碎片（碎片会附着皿底，影响后续细胞贴壁）；②混合生长维护：换液时用移液管轻轻吸取上清（保留底部 2mL 旧培养基），收集悬浮细胞团，离心后与贴壁消化细胞合并传代；若悬浮细胞比例超过 30%，需检查培养基是否充足（不足会导致细胞脱落）或消化时间是否过长（过度消化会增加悬浮比例）；③与 MKN-1 的年龄梯度实验：搭配 MKN-1（35 岁）开展实验时，可：a. 检测衰老相关基因（p16、p21）、耐药基因（ABCB1）的表达差异，分析老年印戒癌的耐药机制；b. 对比化疗药（如氟尿嘧啶）对两株细胞的 IC50 值，验证老年患者是否更易耐药；c. 检测混合生长比例与转移能力（Transwell 实验）的关联，探索悬浮细胞团的转移潜能；④染色体与 STR 监测：长期培养中，每 5 代通过染色体核型分析（观察数目是否在 67~71 范围）、STR 图谱验证细胞身份，若染色体数目异常或 STR 位点改变，需立即更换低代数种子细胞；⑤印戒形态验证：每代培养通过 PAS 染色检测粘液分泌，若印戒样细胞占比低于 50%，提示细胞表型漂移，需及时更换种子细胞。
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