一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
- 细胞名称：NCI-H226 人肺鳞癌细胞（STR 鉴定正确）（与 NCI-H1975（肺腺癌、女性非吸烟）、NCI-H1703（肺鳞癌、54 岁吸烟男）同属肺来源肿瘤细胞，区别于 HFL-1（正常肺成纤维）、BEAS-2B（正常支气管上皮），核心特色为 “男性肺鳞癌胸腔积液转移 +~60 小时慢倍增 + 明确男性核型 + 额外 STR 位点”，是男性肺鳞癌转移机制、慢增殖肿瘤研究、肺癌病理亚型差异研究的关键模型；可与 NCI-H1975（肺腺癌、女性非吸烟）、NCI-H1703（肺鳞癌、男性吸烟）、HFL-1（正常肺成纤维）组成 “肺细胞 – 病理亚型（鳞癌 / 腺癌）+ 转移状态（转移 / 原发）+ 性别（男 / 女）+ 吸烟 / 非吸烟背景 + 正常对照” 体系，探索转移、性别、吸烟状态对肺癌特性的综合影响，同时因慢增殖特性，适合开展长周期转移机制及药物耐受实验）
- 细胞别称：NCI.H226; NCI H226; H226; H-226; HUT-226; HUT 226; NCIH226；人肺鳞癌细胞（别称以 “NCI-H226” 为核心，“NCI” 前缀与 NCI-H1975、NCI-H1703（NCI-H 系列）形成系列关联，“HUT-226” 为早期曾用名，大小写、连接符及空格差异为常见书写变体，统一标注便于实验记录检索；“人肺鳞癌细胞” 明确标注器官、病理亚型，贴合 “肺癌细胞 + 机构前缀 + 数字 + 病理亚型” 体系，避免与 NCI-H1975 的 “肺腺癌”、HFL-1 的 “成纤维细胞” 混淆，精准定位鳞癌亚型）
- 种属来源：人
- 性别年龄：男；未明确（Amelogenin：X,Y 明确男性核型，与 NCI-H1975（女性）形成 “男性 – 女性” 性别对照，与 NCI-H1703（男性吸烟）形成 “同性别不同转移状态” 对照，与 HT-29（44 岁女性非吸烟）形成 “男性 – 女性不同器官肿瘤” 对照；年龄未标注，结合临床肺鳞癌转移高发年龄（50 岁以上）及慢增殖特性，推测为中老年个体，可通过细胞衰老相关基因（如 p21）表达与 NCI-H1703（54 岁）间接对比，为男性中老年肺鳞癌转移研究提供年龄参考）
- 组织来源：肺；源自转移部位：胸腔积液（明确为肺鳞癌胸腔积液转移灶来源，保留肺鳞癌转移特有的 “胸腔微环境适应、高侵袭性、转移相关基因高表达” 特性；区别于 NCI-H1975 的肺腺癌原发灶、NCI-H1703 的肺鳞癌原发灶，可用于男性肺鳞癌胸腔转移机制（如肿瘤细胞穿透胸膜屏障）、肺鳞癌转移与原发的分子差异对比，同时为临床肺鳞癌胸腔积液转移患者的诊疗方案优化提供实验依据）
- 生长特性：贴壁生长（纯贴壁生长模式与 NCI-H1975、NCI-H1703 一致，但核心特色为 “上皮细胞样贴壁 + 慢增殖”：①增殖特性：10 代以内细胞增殖缓慢（倍增时间～60 小时，是已梳理肺癌细胞中最慢，比 NCI-H1975 慢 15-32 小时，比 NCI-H1703 慢 20-30 小时），无有限传代限制（永生化癌细胞，区别于 HFL-1 的有限细胞系）；②贴壁特性：贴壁强度高于 NCI-H1975（腺癌原发）、低于 NCI-H1703（鳞癌原发），细胞呈紧密铺路石样排列（鳞癌上皮细胞特征，区别于 HFL-1 的放射状分布）；对数生长期为接种后 48-120 小时，传代需每 36 小时镜检 1 次，待密度达 70%-80% 时按 1:2 传代（低于 NCI-H1975 的 1:2-1:3），传代时需适度消化（避免过度消化影响细胞贴壁能力），适合开展长周期转移机制实验（如侵袭迁移追踪）、慢增殖肿瘤药物敏感性研究）
- 细胞形态：上皮细胞样（细胞呈多边形，排列紧密呈铺路石样，胞质丰富，含肺鳞癌细胞特有的角质小体（光镜下可见），核浆比略大于 NCI-H1975（腺癌），体现鳞癌与腺癌的形态差异；与 NCI-H1975（腺癌上皮样、松散排列）相比，排列更紧密且含角质小体，与 NCI-H1703（鳞癌上皮样、紧密排列）相比，细胞间隙略宽（转移细胞特征）；可通过 “上皮样 + 紧密铺路石样 + 角质小体” 结合鳞癌标志物（如 CK5/6）快速鉴别，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞（上皮样）通过肺鳞癌特异性标志物（如 p63 高表达）进一步区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “慢增殖、转移特性、鳞癌形态” 核心属性，建议传代次数不超过 10 代（少于 NCI-H1975 的 12 代），防止长期传代导致特性漂移，如增殖速度加快（＜50 小时）、角质小体减少、转移相关基因（如 MMP2）表达下降）
- 背景介绍：NCI-H226 细胞于 1980 年分离建立，源自男性肺鳞癌患者胸腔积液转移灶，核心特性及应用如下：①转移与增殖特色：胸腔积液转移背景使其成为肺鳞癌转移机制研究的理想模型，~60 小时慢增殖特性模拟临床慢进展型肺鳞癌，可用于探索慢增殖肿瘤的转移优势（如低增殖与高存活的平衡）；②应用场景：广泛用于男性肺鳞癌胸腔转移机制（如胸膜侵袭信号通路）、慢增殖肿瘤药物筛选（需延长药物处理时间）、肺鳞癌与腺癌的病理差异研究，同时可与 NCI-H1703（鳞癌原发）搭配开展 “原发 / 转移” 对比实验，探索鳞癌转移的分子演变）
- STR 位点信息：Amelogenin：X,Y（明确男性核型，与性别标注一致，无性别矛盾问题，验证细胞身份，排除交叉污染，与 NCI-H1975（X）、NCI-H1703（X,Y）形成性别核型对照）; CSF1PO:10,11（与 NCI-H1703 的 12 纯合子差异，体现鳞癌不同细胞株 STR 差异）；D12S391:22,22（额外检测位点，区别于 NCI-H1975、NCI-H1703，核心鉴别位点）；D13S317:13,14（与 NCI-H1703 的 10 纯合子差异显著）；D16S539:9,12（与 NCI-H1975 一致，体现肺肿瘤细胞 STR 共性）；D18S51:16,16（纯合子，与 NCI-H1975 的 13 纯合子差异）；D19S433:15,15（纯合子，与 NCI-H1975 的 15,15.2 差异）；D21S11:29,32.2；D2S1338:25,25（纯合子，高片段长度等位基因，鳞癌特色）；D2S441:14,14（额外检测位点）；D3S1358:16,16（纯合子，与 NCI-H1975 的 14,15 差异）；D5S818:11,12（与 NCI-H1975 一致）；D6S1043:13,18（额外检测位点）；D7S820:8,10（与 NCI-H1975 的 8 纯合子差异）；D8S1179:14,15；FGA:20,23；Penta D:9,10（额外检测位点）；Penta E:12,15（额外检测位点）；TH01:8,9.3（与 NCI-H1975 一致）；TPOX:8,1（罕见等位基因，核心鉴别位点）；（STR 位点含 3 个额外检测位点（D12S391、D2S441、D6S1043）、罕见等位基因（TPOX:1）及高片段长度等位基因，与 NCI-H1975、NCI-H1703 的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与 ATCC CRL-5826 数据比对，确认细胞身份及肺鳞癌转移属性）
- 生物安全等级：1（与 NCI-H1975、NCI-H1703、HFL-1 的安全等级一致，低于 HGC-27（等级 2）、WPMY-1（等级 2），操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范，因是转移灶细胞，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理，避免细胞残留污染）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（计数时上皮细胞呈多边形，需轻柔吹打避免细胞团块形成，确保计数准确；冻存管含 10% 二甲基亚砜（DMSO）无血清冻存液，经检测复苏后 72 小时存活率≥80%（慢增殖细胞复苏后贴壁及增殖启动时间长），且上皮样形态、鳞癌特性无显著改变；T25 瓶发货时细胞密度达 60%-70%（与 NCI-H1975 相近），标注 “肺鳞癌胸腔积液转移，~60 小时慢增殖，传代间隔长”，提醒用户适配慢增殖节奏）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响细胞慢增殖过程、鳞癌标志物表达及转移相关实验结果，保障与 NCI-H1975、NCI-H1703 平行实验的可靠性）
- 保藏机构：ATCC; CRL-5826（国际权威机构单一保藏，细胞来源可追溯性强，男性肺鳞癌转移特性、慢增殖属性经过严格验证，与 NCI-H1975 的 ATCC 单一保藏体系一致，便于国内外科研机构协作及文献结果复现）
- 培养基：1640+10% FBS+PS（青霉素 – 链霉素）（即 RPMI-1640 培养基，核心特色：①与 NCI-H1975 的 DMEM、NCI-H1703 的 RPMI-1640 配方一致（基础培养基相同，区别于 Calu-3 的 MEM）；RPMI-1640 含适配慢增殖鳞癌细胞的营养配比，支持其角质化过程及转移相关蛋白合成；②10% FBS 需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清，避免血清中生长因子异常加快细胞增殖，改变慢增殖特性；③PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响细胞鳞癌表型及致瘤性）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（与 NCI-H1975、NCI-H1703 的常规 CO₂培养条件一致，湿度维持在 75%-80%（高于常规细胞），减少培养基蒸发导致渗透压升高；培养箱内避免剧烈晃动，防止贴壁细胞脱落；与其他肺细胞培养条件完全一致，无需特殊调整，便于多细胞株并行开展 “多维度对比” 实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配上皮细胞特性与慢增殖需求：①选择对数生长期后期细胞（密度 80%，增殖活性最佳），用 0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 3-4 分钟（长于 NCI-H1975 的 2-3 分钟，因贴壁强度略高），镜下见细胞间隙增大即可终止，轻柔吹打避免细胞破碎；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 2.5×10⁶cells/mL（高于 NCI-H1975 的 2×10⁶cells/mL，补偿慢增殖导致的复苏后生长缓慢）；③冻存流程：4℃平衡 40 分钟→-20℃放置 3 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1.5 分钟融化，离心后用预热的 RPMI-1640 培养基重悬，直接接种，避免 DMSO 对细胞角质化过程及转移相关蛋白（如 CXCR4）的影响）
- 倍增时间：~60 hours（增殖速度慢，为已梳理肺癌细胞中最慢，对数生长期为接种后 48-120 小时，需每 36 小时镜检 1 次细胞密度，传代间隔 5-7 天；实验设计需适配长周期，如药物处理时间建议 96-120 小时（4-5 天），细胞周期实验需延长培养至 144 小时以上，确保细胞完成一个完整周期）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过 RPMI-1640 培养基适应性培养、鳞癌标志物检测（CK5/6 阳性）及增殖速度验证（~60 小时），确保核心特性稳定；下单后 48 小时内可安排发货，因慢增殖，建议比 NCI-H1975（1 周货期）提前 3 天下单，保障 “不同增殖速度” 平行实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中用固定支架防止培养瓶晃动，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入 5% CO₂培养箱，48 小时内不观察不换液，待细胞完全适应环境后再操作）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，国内运输一般配备 1kg 干冰，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，最大限度缩短运输时间，降低细胞活性损失及慢增殖特性改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 NCI-H1975、NCI-H1703 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；实验过程中需妥善处理含转移细胞的培养基，避免环境暴露，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①慢增殖实验设计：开展药物敏感性实验时，需延长处理时间至 96 小时（常规细胞为 48 小时），设置药物浓度梯度时需覆盖更低浓度（如 0.001-10μM），避免高浓度药物导致细胞快速死亡掩盖慢增殖特性；检测细胞活性推荐使用 CCK-8 法（比 MTT 法更适合慢增殖细胞，检测窗口宽）；②转移机制实验：搭配 NCI-H1703（鳞癌原发）开展 Transwell 侵袭实验时，需将培养时间延长至 72 小时（NCI-H1703 为 48 小时），计数穿膜细胞时需注意 NCI-H226 因慢增殖穿膜数可能较少，但侵袭效率（穿膜数 / 接种数）可能更高（转移细胞特性）；③病理亚型对比实验：与 NCI-H1975（肺腺癌）对比时，可：a. 检测鳞癌标志物（CK5/6、p63，NCI-H226
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