一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
- 细胞名称：NCI-H3255 人肺癌细胞（与 NCI-H292（肺黏液上皮样癌转移、32 岁女）、NCI-H1975（肺腺癌原发、女性非吸烟）同属肺来源肿瘤细胞，区别于 HFL-1（正常肺成纤维）、BEAS-2B（正常支气管上皮），核心特色为 “肺来源上皮样贴壁细胞 + 1640 培养基 + 15% 高血清需求 + 10 代以内低代数”，是肺癌基础研究、药物筛选的通用模型；可与 NCI-H292（黏液癌转移）、NCI-H1975（腺癌原发）、HFL-1（正常）组成 “肺细胞 – 潜在病理亚型梯度 + 正常对照” 体系，探索高血清需求与肺癌细胞代谢、增殖的关联，同时因无明确病理亚型，适合开展肺癌通用机制（如增殖、凋亡）研究）
- 细胞别称：H3255；NCI-H3255；人肺癌细胞（别称以 “NCI-H3255” 为核心，“NCI” 前缀与 NCI-H292、NCI-H1975（NCI-H 系列）形成系列关联，大小写差异为常见书写变体，统一标注便于实验记录检索；“人肺癌细胞” 明确标注器官与肿瘤属性，因未提及病理亚型，需后续结合形态（上皮样）及实验（如标志物检测）补充，贴合 “肺癌细胞 + 机构前缀 + 数字” 的基础命名体系，避免与其他器官癌细胞（如结直肠 SW 系列）混淆）
- 种属来源：人
- 性别年龄：未明确（建议实验前通过 STR 位点 Amelogenin 基因（若后续补充 STR 数据）或 SRY 基因 PCR 验证性别，通过细胞衰老标志物（如 p16、SA-β-gal）检测结合临床肺癌高发年龄（50 岁以上）推测年龄，避免因性别年龄缺失影响针对性实验设计（如性别相关通路研究、年龄与药物敏感性关联分析））
- 组织来源：肺（未明确具体病理亚型（如腺癌、鳞癌）及是否为转移灶，推测为肺原发肿瘤细胞，保留肺肿瘤特有的上皮细胞属性及基础生物学特征；区别于 NCI-H292 的肺黏液上皮样癌淋巴结转移灶、NCI-H1975 的肺腺癌原发灶，可用于肺癌通用生物学特性研究（如培养基血清浓度适配性），待明确病理亚型后，可进一步开展亚型特异性实验）
- 生长特性：贴壁生长（纯贴壁生长模式与 NCI-H292、NCI-H1975 一致，核心特色为 “上皮细胞样贴壁 + 15% 高血清依赖”：①增殖特性：10 代以内细胞增殖节奏未明确标注，结合 15% 高血清需求推测为中等增殖速度（倍增时间预计 35-50 小时，与 NCI-H292 的 48 小时相近），无有限传代限制（永生化癌细胞，区别于 HFL-1 的有限细胞系）；②贴壁特性：贴壁强度预计介于 NCI-H1975（腺癌原发，贴壁较弱）与 NCI-H226（鳞癌转移，贴壁较强）之间，细胞呈典型上皮样铺路石样排列；对数生长期需通过实验验证（建议接种后 24-72 小时监测细胞密度），传代需在细胞密度达 70%-80% 时进行，传代比例建议 1:2-1:3，传代时需注意 15% 血清培养基的同步更换，避免血清浓度骤降影响细胞贴壁与增殖）
- 细胞形态：上皮细胞样（细胞呈多边形，排列规整呈铺路石样，胞质丰富，核浆比适中，具备肺肿瘤上皮细胞典型形态特征；与 NCI-H292（黏液癌，含黏液颗粒）相比，无黏液分泌相关形态特征，与 NCI-H1975（腺癌，松散排列）相比，排列紧密程度需进一步实验观察；可通过 “上皮样 + 高血清需求” 初步鉴别，建议后续通过肺肿瘤亚型标志物检测（如腺癌 TTF-1、鳞癌 CK5/6）明确病理亚型，避免与其他上皮样肿瘤细胞（如肾癌细胞 OS-RC-2）混淆）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “贴壁特性、高血清依赖、上皮形态” 核心属性，建议传代次数不超过 12 代，防止长期传代导致特性漂移，如血清依赖度下降（可适应 10% FBS）、贴壁能力减弱、细胞形态向梭形转变）
- STR 鉴定：未明确具体位点信息（建议参考随货 STR 鉴定报告或通过 PCR 检测核心 STR 位点（如 Amelogenin、CSF1PO、D13S317 等）验证细胞身份，重点关注 Amelogenin 基因以确认性别，排除细胞交叉污染（如与 NCI-H 系列其他肺癌细胞混淆），确保实验用细胞身份准确）
- 生物安全等级：1（参考同类肺肿瘤细胞（NCI-H292、NCI-H1975）的安全等级，预计为 1 级，低于 HGC-27（等级 2）、WPMY-1（等级 2）；操作时需遵循生物安全一级实验室防护规范，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟处理，避免细胞残留污染）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（计数时需轻柔吹打上皮样细胞，避免细胞团块形成，确保计数准确；冻存管含 10% 二甲基亚砜（DMSO）无血清冻存液，建议复苏后 48 小时内检测存活率（预计≥80%），且贴壁特性、上皮形态无显著改变；T25 瓶发货时细胞密度达 60%-70%，标注 “需 15% FBS 培养基，建议复苏后优先验证细胞身份”，提醒用户适配高血清培养条件及身份验证）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染影响细胞贴壁、增殖及后续实验（如药物筛选），保障与其他肺肿瘤细胞平行实验的可靠性）
- 保藏机构：未明确标注（建议实验前咨询供应商获取保藏机构信息（如 ATCC、ECACC 或国内权威机构），通过保藏机构数据库查询细胞背景（如病理亚型、性别年龄），补充完善细胞基础信息，提升实验可追溯性与结果重复性）
- 培养基：1640+15% FBS+1% PS（青霉素 – 链霉素）（核心特色：①采用 RPMI-1640 培养基，与 NCI-H292 的 1640 培养基一致，区别于 NCI-H1975 的 DMEM；15% FBS 为高血清浓度（高于同类肺癌细胞的 10% FBS），适配细胞高营养需求，可能与细胞代谢活跃或增殖依赖相关，需选择低内毒素、批次间差异小的优质胎牛血清，避免血清质量影响细胞特性；②1% PS 终浓度为 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响细胞贴壁与增殖）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（与 NCI-H292、NCI-H1975 的常规 CO₂培养条件一致，湿度维持在 70%-80%，定期更换水盘，防止培养基蒸发导致渗透压升高及血清浓度异常；培养箱内避免剧烈晃动，防止贴壁细胞脱落；与其他肺肿瘤细胞培养条件兼容性高，仅需注意 15% FBS 的单独配置，便于多细胞株并行实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配贴壁及高血清特性：①选择对数生长期细胞（密度 80%，活性最佳），用 0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 2-3 分钟，镜下见细胞间隙增大即可终止，轻柔吹打避免细胞破碎；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 2.5×10⁶cells/mL（高于常规 10% FBS 细胞，补偿高血清细胞冻存损失）；③冻存流程：4℃平衡 30 分钟→-20℃放置 2 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1 分钟融化，离心后用预热的 15% FBS 1640 培养基重悬，直接接种，避免 DMSO 及血清浓度骤降影响细胞活性）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过 15% FBS 1640 培养基适应性培养、支原体检测及细胞形态验证，确保核心培养特性稳定；下单后 48 小时内可安排发货，因需 15% 高血清，建议用户提前准备对应培养基，避免到货后延误培养）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中用固定支架防止培养瓶晃动，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入 5% CO₂培养箱，24 小时后观察细胞贴壁状态，48 小时内首次换液（使用 15% FBS 1640 培养基），确保细胞适应环境）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，国内运输一般配备 1kg 干冰，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，最大限度缩短运输时间，降低细胞活性损失及高血清适应特性改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与 NCI-H292、NCI-H1975 等细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；实验过程中需妥善处理含高血清的培养基，避免环境污染）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①高血清培养管理：严格使用 15% FBS 配置培养基，避免擅自降低血清浓度（可能导致细胞增殖减慢、贴壁脱落）；更换血清批次时，需先进行小体积适应性培养（如 T25 瓶接种 1×10⁵cells），观察 2-3 代，确认细胞形态、增殖无异常后再批量使用；②细胞身份与亚型验证：建议首次培养时，通过 STR 检测（覆盖至少 16 个核心位点）验证细胞身份，同时采用免疫荧光或 Western Blot 检测肺肿瘤亚型标志物（腺癌：TTF-1、Napsin A；鳞癌：CK5/6、p63），明确病理亚型，为后续实验设计提供依据；③增殖特性探索：通过 CCK-8 法绘制细胞生长曲线，检测 0-120 小时细胞密度变化，计算倍增时间（预计 35-50 小时），确定对数生长期（建议接种后 24-72 小时），为药物处理、转染等实验提供最佳时间窗口；④与同类细胞对比实验：搭配 NCI-H292（10% FBS）开展血清浓度影响实验时，可设置 10%、15%、20% FBS 三个梯度，检测细胞增殖（CCK-8）、贴壁率（结晶紫染色）的差异，分析高血清需求的分子机制（如检测营养感知通路 mTOR 的活性）；⑤长期培养监测：每 5 代检测细胞形态、血清依赖度（15% FBS vs 10% FBS 增殖对比）及支原体，若发现形态异常或血清依赖度下降，需立即更换低代数种子细胞。
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