一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
- 细胞名称：NCI-H520 人肺鳞癌细胞（STR 鉴定正确）（与 NCI-H441（肺腺癌心包转移、33 岁男）、NCI-H226（肺鳞癌胸腔转移、男性）同属肺来源肿瘤细胞，区别于 HFL-1（正常肺成纤维）、BEAS-2B（正常支气管上皮），核心特色为 “肺鳞癌原发灶 + p53 mRNA 低表达无 DNA 异常 + 宽范围倍增 + 角蛋白 / 波形蛋白双阳性”，是肺鳞癌原发机制、p53 低表达调控、上皮 – 间质转化（EMT）倾向研究的关键模型；可与 NCI-H441（肺腺癌转移）、NCI-H226（肺鳞癌转移）、HFL-1（正常）组成 “肺细胞 – 病理亚型（鳞癌 / 腺癌）+ 转移状态（原发 / 转移）+ 正常对照” 体系，探索肺鳞癌原发与转移的分子差异及 p53 低表达对肿瘤特性的影响，同时因宽范围倍增，适合研究增殖异质性与化疗耐药的关联）
- 细胞别称：H520; H-520; NCI-HUT-520; NCIH520; 人肺癌细胞（别称以 “NCI-H520” 为核心，“NCI” 前缀与 NCI-H441、NCI-H226（NCI-H 系列）形成系列关联，“NCI-HUT-520” 为早期曾用名，大小写、连接符差异为常见书写变体，统一标注便于实验记录检索；“人肺癌细胞” 需补充 “鳞癌” 病理亚型，明确与 NCI-H441 的腺癌差异，贴合 “肺癌细胞 + 机构前缀 + 数字 + 病理亚型” 体系，避免与其他器官癌细胞混淆）
- 种属来源：人
- 性别年龄：未明确（建议实验前通过 STR 位点 Amelogenin 基因（检测结果为 X，需结合 SRY 基因 PCR 确认是否为女性或男性 Y 染色体缺失）及细胞衰老标志物（如 SA-β-gal）推测年龄，参考临床肺鳞癌高发年龄（50 岁以上），可通过与 NCI-H441（33 岁）、NCI-H226（中老年推测）的增殖特性对比，辅助判断年龄背景，避免影响性别相关实验设计）
- 组织来源：肺；病理亚型：肺鳞状细胞癌；来源类型：原发灶（明确为肺鳞癌原发灶来源，保留鳞癌原发特有的 “角质化倾向、p53 表达异常、无转移相关微环境适应特征” 特性；区别于 NCI-H441 的肺腺癌心包转移灶、NCI-H226 的肺鳞癌胸腔转移灶，可用于肺鳞癌原发机制研究（如吸烟相关致癌物代谢）、原发与转移鳞癌的分子差异对比，同时为临床肺鳞癌原发灶诊断标志物验证提供实验依据）
- 生长特性：贴壁生长（纯贴壁生长模式与 NCI-H441、NCI-H226 一致，核心特色为 “上皮细胞样贴壁 + 宽范围倍增 + 软琼脂克隆能力”：①增殖特性：10 代以内细胞增殖异质性显著（倍增时间 32-60 小时，覆盖中快至慢增殖区间，快于 NCI-H226 的 60 小时，慢于 NCI-H441 的 30-40 小时），无有限传代限制（永生化癌细胞）；②贴壁特性：贴壁强度高于 NCI-H441（腺癌转移）、低于 NCI-H226（鳞癌转移），细胞呈紧密铺路石样排列，且可在软琼脂中克隆（克隆形成率预计 15%-25%，低于 NCI-H441 的 20%-30%）；对数生长期需根据倍增时间动态调整观察频率（快增殖时 24 小时镜检，慢增殖时 36 小时镜检），待密度达 70% 时按 1:2 传代，适合开展增殖异质性相关实验（如分选不同增殖速率细胞亚群））
- 细胞形态：上皮细胞样（细胞呈多边形，排列紧密呈铺路石样，胞质丰富，含鳞癌特有的角质小体（光镜下可见），核浆比大于 NCI-H441（腺癌），体现鳞癌与腺癌的形态差异；与 NCI-H441（腺癌上皮样、含 SP-A 颗粒）相比，无黏液分泌特征且角质小体阳性，与 NCI-H226（鳞癌转移、排列松散）相比，排列更紧密；可通过 “上皮样 + 角质小体 + 角蛋白 / 波形蛋白双阳性” 快速鉴别，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞（上皮样）通过肺鳞癌特异性标志物（如 p63）进一步区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “p53 低表达、宽范围倍增、双阳性标志物” 核心属性，建议传代次数不超过 10 代，防止长期传代导致特性漂移，如 p53 mRNA 表达升高、倍增时间范围缩小（＜40 小时或＞50 小时）、波形蛋白表达下降）
- 背景介绍：NCI-H520 细胞 1982 年由 A.F. Gazdar 团队从肺鳞癌患者肺标本中建立，核心特性及应用如下：①分子特色：p53 mRNA 低表达但无大的 DNA 结构异常（区别于其他肺癌细胞的 p53 突变），角蛋白（上皮标志物）、波形蛋白（间质标志物）双阳性（提示 EMT 倾向），是研究 p53 表达调控及 EMT 早期阶段的理想模型；②功能特色：软琼脂克隆能力及裸鼠致瘤性（21 天 100% 成瘤），适合肿瘤干细胞及体内药效实验；③应用场景：广泛用于肺鳞癌原发机制、p53 低表达功能、EMT 倾向研究，同时可与 NCI-H226（鳞癌转移）搭配开展 “原发 / 转移” 对比实验，探索 EMT 与转移的关联）
- STR 位点信息：Amelogenin: X（性别核型待确认，需结合 SRY 基因 PCR 验证，避免因 Y 染色体缺失导致性别误判）; CSF1PO: 10（纯合子，与 NCI-H441 的 11,12 差异）；D13S317: 10,11（与 NCI-H226 的 13,14 差异显著）；D16S539: 8,13（与 NCI-H441 的 9,13 差异）；D5S818: 12,13（与 NCI-H441 的 11,12 差异）；D7S820: 8,12（与 NCI-H226 的 8,10 差异）；TH01: 10（纯合子，与 NCI-H441 的 9.3,9.3 差异）；TPOX: 8（纯合子）；vWA: 18,19（高片段等位基因，鳞癌特色）；（STR 位点含高片段等位基因及多个纯合子，与 NCI-H441、NCI-H226 的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与 ATCC HTB-182 数据比对，确认细胞身份及肺鳞癌属性）
- 生物安全等级：1（与 NCI-H441、NCI-H226、HFL-1 一致，低于 HGC-27（等级 2）；操作时需遵循生物安全一级规范，因存在 EMT 倾向，实验废弃物需经 121℃高压灭菌 30 分钟，避免细胞残留污染）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（计数时需轻柔吹散细胞团，确保计数准确；冻存管含 10% DMSO 无血清冻存液，复苏后 48 小时存活率≥80%（宽范围倍增导致部分细胞复苏活性差异），且双阳性标志物、上皮形态无显著改变；T25 瓶发货时细胞密度达 60%，标注 “肺鳞癌原发灶，p53 低表达，倍增时间波动大”，提醒用户关注增殖异质性）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体，结果为阴性，避免污染影响 p53 表达及软琼脂克隆实验，保障与其他肺细胞平行实验的可靠性）
- 保藏机构：ATCC; HTB-182；中国科学院昆明细胞库（国际权威机构与国内机构双重保藏，细胞来源可追溯性强，肺鳞癌原发特性、p53 表达特征经过严格验证，与 NCI-H441 的 ATCC 双编号保藏体系互补，便于国内外协作研究）
- 培养基：RPMI-1640+10% FBS+PS（与 NCI-H441 的培养基配方一致，区别于 NCI-H226 的同配方但不同应用场景；RPMI-1640 含适配鳞癌原发细胞的营养配比，支持其宽范围倍增及双阳性标志物表达；10% FBS 需选择低内毒素批次，避免影响 p53 mRNA 表达；PS 终浓度 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，不影响致瘤性）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（与 NCI-H441、NCI-H226 的常规 CO₂条件一致，湿度 70%-80%；因增殖异质性，需定期观察细胞密度，避免部分快增殖细胞过度生长；培养环境与其他肺细胞兼容，无需特殊调整）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配增殖异质性：①选择对数生长期中期细胞（兼顾快慢增殖亚群），0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 3 分钟，轻柔吹打；②1000rpm 离心 5 分钟，无血清冻存液重悬至 2.5×10⁶cells/mL；③冻存流程：4℃平衡 30 分钟→-20℃ 2 小时→-80℃过夜→液氮；复苏时 37℃水浴 1 分钟，用预热培养基重悬，避免 DMSO 影响 p53 蛋白功能）
- 染色体：55-60（中高异倍体，染色体数目高于 NCI-H441（未明确）、低于 NCI-H226（未明确），核型稳定；异倍体特征可能与宽范围倍增相关，实验设计需注意染色体数目对基因表达检测的潜在影响）
- 倍增时间：~32-60 hours（增殖异质性核心特征，需通过 CCK-8 法绘制生长曲线确定具体批次倍增时间（建议检测 3-5 天）；实验设计需适配宽范围，如药物处理时间建议 72 小时，确保覆盖完整增殖周期）
- 致瘤性：Yes, in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5)).（裸鼠高成瘤能力，成瘤周期短（21 天）、成瘤率 100%，接种密度与 NCI-H226 一致；成瘤病理显示典型鳞癌结构（角质化），可与 NCI-H226 同步开展裸鼠成瘤，对比原发与转移鳞癌的体内生长差异）
- 基因表达情况：①p53 mRNA 低表达（无 DNA 结构异常，区别于突变型 p53）：可通过 qPCR 检测 p53 mRNA 水平（引物：正向 5′-TGGAAGCCGGTTCAGGTGG-3’，反向 5′-GGCCTTGGAACTCAAGGATG-3’），与正常肺组织（HFL-1）对比验证；②角蛋白 + 波形蛋白双阳性：通过免疫荧光（角蛋白一抗：ab9377，波形蛋白一抗：ab92547）检测双阳性细胞比例（预计 30%-50%），分析 EMT 倾向；③无神经丝三联蛋白表达：验证上皮来源，排除神经内分泌分化）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过培养基适应性培养、p53 mRNA 检测（低表达）及双阳性标志物验证，确保核心特性稳定；下单后 48 小时内发货，建议与 NCI-H226 同步下单，保障 “原发 / 转移” 平行实验时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运费，防震包装 + 2-8℃冰袋，运输时固定培养瓶，到达后立即放入 CO₂培养箱，24 小时后观察贴壁状态）/ 冻存发货（加干冰费用，确保干冰剩余量≥60%） 顺丰次晨达，缩短运输时间减少增殖异质性波动
- 供应限制：仅限于科学研究，严禁临床使用；实验操作需遵循生物安全规范，避免细胞气溶胶扩散
- 特别说明：以下操作仅供参考，以随货说明书为准；核心建议：①p53 实验设计：开展 p53 功能研究时，可通过慢病毒过表达 p53，检测其对细胞增殖（CCK-8）、克隆能力（软琼脂）的影响，对比过表达前后差异；②增殖异质性研究：通过流式分选（如 Ki67 染色）分离快慢增殖亚群，检测两亚群 p53 表达、EMT 标志物（如 E-cadherin）的差异；③原发 / 转移对比实验：与 NCI-H226 对比时，可检测 EMT 相关基因（如 Snail、Twist）、转移基因（如 MMP9）的表达，分析原发与转移的分子差异；④长期培养监测：每 3 代检测 p53 mRNA 表达、双阳性标志物及倍增时间，若发现特性漂移，立即更换低代数细胞。
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