一、细胞基本属性
- 细胞名称：NCI-H660 人神经内分泌前列腺癌细胞（STR 鉴定正确）（与 MDA-PCA-2B、LNCaP、DU145 同属前列腺癌细胞，但病理亚型为神经内分泌型（前列腺癌少见亚型，占比约 2%-5%），区别于其他三株的腺癌亚型，是前列腺癌神经内分泌分化、去势抵抗后期恶性进展研究的专属模型，可与其他前列腺癌细胞组成 “腺癌 – 神经内分泌癌” 亚型对照体系，探索前列腺癌亚型转化机制）
- 细胞别称：NCI-H660；NCIH660；H660；人神经内分泌前列腺癌细胞（别称含 “NCI-” 前缀，明确标识由美国国家癌症研究所（NCI）建系，与 MDA-PCA-2B（“MDA-” 前缀）、LNCaP（无前缀）、DU145（“DU” 前缀）形成前列腺癌细胞株的清晰区分；“神经内分泌” 标注明确亚型，贴合 “研究机构 + 编号 + 亚型” 的精准命名体系，便于实验记录及文献检索时快速定位亚型特性）
- 种属来源：人
- 性别年龄：男；63 岁（明确的老年高加索男性背景，与 LNCaP（50 岁白人男）、DU145（推测中老年男）形成中年 – 老年年龄梯度，与 MDA-PCA-2B（未明确）形成种族补充，为前列腺癌神经内分泌亚型的年龄、种族发病机制研究提供精准模型）
- 组织来源：前列腺癌，淋巴结转移（明确为淋巴结转移灶来源，且是神经内分泌亚型转移灶，保留该亚型特有的 “神经内分泌标志物表达、激素非依赖性生长” 特性；区别于 LNCaP 的左锁骨淋巴结转移（腺癌）、DU145 的脑部转移（腺癌），可用于前列腺癌神经内分泌亚型淋巴转移机制研究，同时为临床神经内分泌前列腺癌转移诊断提供实验依据）
- 生长特性：混合生长（核心特性为 “贴壁 + 悬浮” 混合生长，贴壁细胞呈上皮样，悬浮细胞形成细胞团，与 MDA-PCA-2B（纯贴壁、贴壁差）、LNCaP（纯贴壁、成簇）、DU145（纯贴壁、稳定）的生长模式差异显著；生长速度未明确标注，结合神经内分泌肿瘤特性推测偏快，需通过 “及时吹散团块” 维持生长状态，适合开展肿瘤细胞团聚与转移关联性研究）
- 细胞形态：上皮细胞样（贴壁细胞呈多边形，具备前列腺癌细胞上皮形态特征；悬浮细胞成团生长，团块大小不均，核浆比增大，部分细胞可见神经内分泌细胞特有的胞质突起（需通过免疫荧光或电镜观察）；与其他前列腺癌细胞（纯上皮样）相比，混合生长形态及神经内分泌特征是关键鉴别点，可通过形态观察初步判断细胞纯度及亚型特性，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞形成器官特异性区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “神经内分泌亚型特性、混合生长、成团生长” 的核心特征，建议传代次数不超过 12 代，防止长期传代导致特性漂移，如神经内分泌标志物表达下降、悬浮团块减少、混合生长模式改变，影响实验重复性）
- 特别注意（生长与维护）：
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- 成团生长处理：因细胞成团生长，当团块直径超过 100μm（约占视野 1/5）时，需及时用 1mL 移液器轻柔吹散（避免用力过猛导致细胞破碎）；吹散频率建议每 2 天 1 次，防止团块过大导致内部细胞缺氧坏死，同时维持混合生长平衡；
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- 转移相关操作：传代或换液时，需同时收集贴壁细胞与悬浮细胞团，避免遗漏悬浮细胞导致细胞数量不足；离心时转速控制在 800-1000rpm（低于常规细胞的 1000-1200rpm），防止破坏细胞团结构；
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- 形态监测：培养过程中需每天观察细胞团大小及贴壁细胞状态，若发现团块持续增大且难以吹散，可能提示细胞分化状态改变，需更换低代数种子细胞。
- 背景介绍：NCI-H660 细胞来源于 63 岁成年高加索地区男性的前列腺癌细胞在淋巴结的转移灶，核心特性及应用如下：①亚型特色：作为前列腺癌神经内分泌亚型的经典模型，表达神经内分泌标志物（如嗜铬粒蛋白 A CgA、突触素 Syn），是研究前列腺癌神经内分泌分化机制（如腺癌向神经内分泌癌转化）、去势抵抗后期亚型转化的关键工具；②激素非依赖性：虽培养基含 β- 雌二醇、氢化可的松，但神经内分泌亚型通常对雄激素不敏感，可用于去势抵抗性前列腺癌（CRPC）后期治疗研究；③应用场景：广泛用于神经内分泌前列腺癌基础研究（如神经内分泌标志物调控）、靶向药物筛选（如针对 NETs 的药物）、亚型转化实验（如腺癌诱导分化为神经内分泌癌），同时可与 LNCaP（激素敏感腺癌）、DU145（去势抵抗腺癌）搭配开展 “腺癌 – 神经内分泌癌” 转化研究，覆盖前列腺癌全病程亚型变化。
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（冻存管建议含 10% 二甲基亚砜（DMSO）的无血清冻存液，细胞计数时需包含贴壁细胞与悬浮细胞团（吹散后计数）；经检测复苏后 48 小时存活率≥80%，且混合生长、成团特性无显著改变；T25 瓶发货时需标注 “混合生长”，提醒用户同时关注贴壁与悬浮细胞）
- 支原体检测：无（每批次细胞均通过 PCR 法检测支原体，覆盖肺炎支原体、人型支原体等常见类型，结果为阴性，可直接用于实验，避免支原体污染影响细胞团形成及神经内分泌特性，保障实验周期稳定性）
- 培养基：1640（RPMI-1640）+5% FBS + 双抗 + 10nMβ- 雌二醇 + 10nM 氢化可的松 + 1*TS (胰岛素转铁蛋白硒)（核心特色：①成分复杂且特殊，区别于其他前列腺癌细胞的简单培养基（如 MDA-PCA-2B 专用培养基、LNCaP 的 RPMI-1640+10% FBS）；②低血清（5% FBS）适配神经内分泌细胞生长，避免高血清抑制神经内分泌标志物表达；③添加 β- 雌二醇、氢化可的松（激素成分）及 TS（生长因子复合物），维持细胞神经内分泌特性及混合生长平衡；④不可随意调整成分，如减少激素或 TS 可能导致细胞团减少、神经内分泌标志物下降，需严格按配方配制，建议与供应方确认试剂批次兼容性）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（培养箱湿度维持在 70%-80%，避免湿度过高导致细胞团过度聚集；培养箱内避免剧烈晃动，防止贴壁细胞脱落加剧；与其他前列腺癌细胞培养条件一致，仅需通过培养基成分及成团处理适配亚型特性，便于多细胞株并行实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作需适配混合生长特性：①收集贴壁细胞（0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 2-3 分钟）与悬浮细胞团，合并后轻柔吹散大团块（保留小团块，避免单细胞化影响复苏后成团能力）；②1000rpm 离心 5 分钟收集细胞，用预冷的无血清冻存液重悬，调整浓度至 3×10⁶cells/mL（高于常规细胞，补偿混合生长复苏损失）；③冻存流程与其他前列腺癌细胞一致，复苏时 37℃水浴 1 分钟融化，离心后用预热的完整培养基（含所有添加剂）重悬，直接接种，避免遗漏激素或 TS 导致细胞适应困难）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过神经内分泌标志物（如 CgA）表达验证及混合生长状态检测，确保亚型特性稳定；培养基需提前 1 天配制（确保激素、TS 溶解均匀），下单后 48 小时内安排发货，可与 LNCaP 同步下单，保障 “腺癌 – 神经内分泌癌” 对比实验的时间一致性）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中避免剧烈颠簸，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入 37℃培养箱，24 小时内不换液，48 小时后观察混合生长状态，按 “特别注意 1” 处理细胞团）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，确保到达时干冰剩余量≥50%，维持细胞冻存状态，避免复苏后神经内分泌特性改变） 顺丰快递（优先选择次日达服务，缩短运输时间，降低细胞活性损失及混合生长模式改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（与其他前列腺癌细胞限制条款一致，严禁用于临床治疗、细胞治疗、美容及其他非科研用途；因涉及神经内分泌亚型，实验废弃物需经高压灭菌（121℃，30 分钟）处理，避免生物危害）
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①培养基配制与管理：严格按配方添加 β- 雌二醇（需用乙醇溶解，避免浓度过高毒性）、氢化可的松、TS，建议现配现用，配好的培养基 4℃保存不超过 1 周；避免反复冻融激素试剂，可分装为小剂量储存；②神经内分泌特性验证：实验前需通过免疫荧光或 Western Blot 检测神经内分泌标志物（CgA、Syn），确保细胞亚型特性稳定；若开展亚型转化实验，可对比诱导前后标志物表达变化，验证实验效果；③与其他前列腺癌细胞的对比实验设计：搭配 LNCaP、DU145 开展实验时，需控制除培养基外的培养条件一致性，可开展以下研究：a. 药物敏感性：检测化疗药（如铂类药物，对神经内分泌癌有效）、抗雄激素药（对比对腺癌与神经内分泌癌的效果差异）的 IC50 值，评估药物亚型特异性；b. 标志物表达：对比神经内分泌标志物（CgA、Syn）与腺癌标志物（PSA）在四株细胞中的表达，明确亚型差异；c. 生长模式关联：分析细胞团大小与转移能力（Transwell 实验）的关系，探索神经内分泌亚型团聚生长的生物学意义；④传代细节与污染防控：传代时需同时处理贴壁与悬浮细胞，避免悬浮细胞团残留导致污染；实验操作在超净工作台内进行，培养基专用，避免与其他细胞培养基交叉使用；定期对培养基添加剂（尤其是 TS）进行无菌检测，防止污染；⑤长期培养监测：每 3 代检测神经内分泌标志物、混合生长比例及成团特性，若发现标志物表达下降或生长模式改变，需立即更换低代数种子细胞，确保实验结果可靠。
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