一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

• 增殖特性：种群倍增时间约 73h，表达 CK7、CK19（上皮标志物）及 E – 钙黏蛋白、波形蛋白、Ki-67（增殖标志物）、CEA、CA19-9（癌症相关标志物）
• 功能特性：悬浮培养可形成含小分支结构的胰腺癌样器官，体外类器官形成能力稳定
• 致瘤性：NXG 小鼠皮下接种成瘤率 100%，移植 1 个月后肝肺无转移性病灶
• 核型特征：复杂核型，以亚三倍体为主（占 90%），其余 10% 为亚四倍体，典型核型为 55、XXY inv (9)、13p +、15p +、rob（21,22）
• 药物抗性：对吉西他滨、紫杉醇、5 – 氟尿嘧啶、奥沙利铂呈交叉耐药性（具体 IC50 值见药物敏感性试验）

  细胞代数：10 代以内

  细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或 1mL 冻存管

  支原体检测：阴性

  培养基：1640 培养基 + 10% FBS+PS（严格按配方配制，保障细胞耐药性与类器官形成能力）

  培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规人体癌细胞培养条件）

  冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

  细胞货期：现货，1 周左右

  运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递

  供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

培养核心操作

1. 传代操作

• 当细胞密度达 70%-80%（上皮样细胞均匀铺满瓶壁，巨核 / 多核细胞形态完整，无密集堆叠）时，弃去旧培养基，用无菌 PBS 轻柔冲洗细胞表面 1 次，避免冲散贴壁的巨核细胞。
• 加入胰酶温和消化，待细胞边缘收缩、间隙增大（约 3-4 分钟，因含少量巨核细胞，消化速度略慢，需逐瓶观察，防止过度消化导致细胞破裂）后，立即加入含 10% FBS 的 1640 培养基终止消化。
• 用移液器轻柔吹打细胞至单细胞悬液（动作缓慢，减少巨核细胞损伤），按 1:3-1:4 比例接种到新培养瓶，维持其耐药性、核型特性及类器官形成潜能。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次新鲜培养基，换液时先缓慢倾倒旧培养基（避免直接冲击细胞层导致巨核细胞脱落），再用 PBS 冲洗 1 次，最后加入足量 “1640+10% FBS+PS” 培养基。
• 因倍增时间较长（约 73h），无需频繁换液；若开展类器官相关实验，换液时需保留部分上清（含细胞分泌的类器官形成相关因子），按 1:1 比例补加新鲜培养基。

3. 类器官培养操作（专项）

• 收集对数期细胞，用无菌 PBS 洗涤 1 次，1000rpm 离心 5 分钟后弃上清，用类器官完全培养基重悬细胞至 1×10⁵cells/mL。
• 将细胞悬液接种到超低吸附培养板，每孔 1mL，置于培养箱中静置培养；培养第 3 天补加 500μL 新鲜类器官培养基，第 7 天可观察到含小分支结构的类器官，按需进行后续实验。

4. 冻存操作

• 选取对数期（增殖旺盛、上皮形态均一、巨核 / 多核细胞比例正常）的细胞，胰酶消化后 1000rpm 离心 5 分钟，弃上清收集细胞沉淀。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，减少低温对复杂核型细胞的损伤，保留类器官形成能力。

5. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化，避免反复冻融破坏细胞），迅速将细胞悬液转移至离心管。
• 加入 5 倍体积新鲜 “1640+10% FBS+PS” 培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热至 37℃的培养基重悬细胞后接种；复苏后 48 小时观察贴壁情况，72 小时后按常规换液，若需开展类器官实验，建议复苏后培养 2 代再进行。