一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）

培养核心操作

1. 传代操作

• 观察细胞密度，当密度达 2×10⁶-4×10⁶cells/mL（细胞悬浮均匀，无明显沉底聚团）时，直接按 1:2-1:3 比例加入新鲜专用培养基稀释。
• 无需胰酶消化，操作时用移液器轻柔吹打 3-5 次，避免用力过猛破坏淋巴母细胞形态，同时防止细胞聚团影响抗体分泌功能。

2. 换液操作

• 每 2-3 天更换 1 次培养基，将细胞悬液转移至离心管，1000rpm 离心 5 分钟后弃去上清（上清中可能含分泌的抗体，需保留可单独收集）。
• 用新鲜专用培养基重悬细胞沉淀，调整密度至 1×10⁶cells/mL 左右后放回培养瓶，补充营养的同时减少代谢废物堆积。

3. 冻存操作

• 收集对数期（增殖旺盛、悬浮分散均一）的细胞悬液，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清。
• 用无血清冻存液重悬细胞至 1×10⁶-2×10⁶cells/ml，分装后按 “4℃静置 30 分钟→-20℃放置 2 小时→-80℃过夜→转入液氮” 的梯度降温，保护淋巴母细胞活性。

4. 复苏操作

• 从液氮中取出冻存管，立即放入 37℃水浴速融（1-2 分钟内完全融化），避免冰晶反复冻融损伤细胞。
• 加入 5 倍体积新鲜专用培养基稀释，1000rpm 离心 5 分钟弃上清，用预热的专用培养基重悬后接种，24-48h 观察细胞存活状态及悬浮能力恢复。