一、细胞基本属性（客服：小烽：18030101858）
细胞名称：RKO-FLUC-eGFP-puro 人结肠腺癌细胞 (FLUC/eGFP 双标)（STR 鉴定正确）
细胞别称：RKO-LUC-EGFP；人结肠腺癌细胞 – 荧光素酶标记 – 绿色荧光标记；人结肠腺癌细胞 – LUC-EGFP
种属来源：人
组织来源：结肠
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞代数：10 代以内（低传代范围，可更好维持 FLUC/eGFP 双荧光标记稳定性及低分化结肠癌细胞特有的成瘤、集落形成能力）
生物安全等级：1 级
注意事项：RKO-LUC-EGFP 细胞经过常温运输后，细胞状态会改变（如细胞缩起、脱落或部分死亡），属于正常现象；收到细胞后需放培养箱过夜稳定，再进行后续操作。
背景与筛选验证
背景介绍
RKO-FLUC-eGFP-puro 细胞稳定共表达萤火虫荧光素酶（FLUC）与增强型绿色荧光蛋白（eGFP），性状稳定，培养时无需抗生素常规维持。既可作为双荧光活性检测的阳性对照，也适用于人结肠腺癌体内成像实验（如裸鼠成瘤、转移模型的双荧光追踪）。
该细胞通过慢病毒转染携带 Luc 基因，亲本 RKO 细胞具备明确分子与功能特征：为低分化结肠癌细胞系，含野生型 p53（蛋白水平高于 RKO-E6 细胞）、缺乏人甲状腺受体核受体（h-TRβ1）；可在裸鼠中成瘤，且能在软琼脂中形成集落，是研究低分化结肠腺癌发病机制、药物筛选的专用细胞株。
puro 药筛浓度
RKO-LUC-EGFP 细胞 puro（嘌呤霉素）药筛浓度为 1.0μg/ml，用于去除未转染细胞；培养过程中建议使用 0.5μg/ml 浓度 puro 维持。低浓度维持可保障双荧光基因稳定表达，同时不影响细胞贴壁生长、成瘤及集落形成能力。
细胞培养核心信息
基础参数
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装；
- 支原体检测：无（无支原体污染，避免干扰细胞增殖、双荧光表达及结肠腺癌相关实验结果，保障数据准确性）；
- 保藏机构：ATCC; CRL-2577（细胞来源可追溯，确保细胞株低分化特性与双荧光标记稳定性）。
培养与冻存
- 培养基：90% MEM 培养基 + 10% FBS（胎牛血清）+PS（青霉素 – 链霉素双抗）+1.0μg/ml puro（仅药筛阶段按此浓度添加，常规培养建议用 0.5μg/ml puro 维持；专用 MEM 培养基适配低分化结肠腺癌细胞营养需求，不可随意替换）；
- 培养条件：气相 95% 空气 + 5% 二氧化碳，温度 37℃（常规 CO₂培养环境即可，无需特殊调整；避免强光直射，减少 eGFP 光漂白，保障双荧光观测效果）；
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存前确保细胞处于对数生长期，保留双荧光特性与成瘤能力；可适当提高冻存密度，减少复苏损伤，复苏后优先观察细胞贴壁状态与双荧光表达）。
货期与运输
- 细胞货期：现货，1 周左右；
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用），顺丰快递；运输过程需尽量减少颠簸，降低细胞脱落概率，结合 “运输后过夜稳定” 要求规划后续操作。
供应限制
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
特别说明
以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；需重点关注运输后细胞的 “过夜稳定” 步骤，避免因立即操作影响细胞状态。
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