一、细胞基本属性
- 细胞名称：VCaP 人前列腺癌细胞（STR 鉴定正确）（与 PC-3 同属前列腺癌骨转移模型，但转移部位为脊椎（骨转移中最常见承重骨部位，占骨转移的 60% 以上），且具备激素敏感性（区别于 PC-3 的去势抵抗），是研究前列腺癌激素敏感性脊椎转移机制、骨微环境 – 激素交互作用的专属模型；可与 PC-3（去势抵抗骨转移）、LNCaP（激素敏感淋巴结转移）组成 “同激素表型 – 不同转移部位”“同转移类型 – 不同激素表型” 双重对照体系，探索前列腺癌骨转移细分部位的特异性机制）
- 细胞别称：VCAP; Vcap; Vertebral Cancer of the Prostate；人前列腺癌细胞（别称含 “Vertebral Cancer of the Prostate” 全称，直接标注 “脊椎来源前列腺癌”，与 PC-3（无部位标识）、LNCaP（无前缀）形成清晰区分；“VCaP” 缩写中 “V” 可对应 “Vertebral”，便于实验记录时快速关联脊椎转移特性，贴合 “转移部位 + 疾病类型” 的精准命名体系，避免与其他前列腺癌细胞混淆）
- 种属来源：人
- 性别年龄：男；未明确（明确男性性别，与前列腺癌男性发病特性一致；虽年龄未标注，但结合 “不受激素影响的前列腺癌患者” 及骨转移多发生于晚期的临床特征，推测为中老年个体，可与 PC-3（62 岁）、LNCaP（50 岁）形成年龄梯度补充，适合中老年男性前列腺癌脊椎转移临床场景模拟）
- 组织来源：器官：前列腺；组织：脊椎转移；疾病：癌（核心特色为脊椎转移灶来源，且是激素敏感性骨转移模型，保留脊椎骨微环境特有的 “承重骨基质组成、神经血管丰富” 适配特性；区别于 PC-3 的泛骨转移、LNCaP 的淋巴结转移，可用于前列腺癌脊椎转移关键机制研究（如肿瘤细胞穿透脊椎骨皮质、压迫神经相关表型），同时为临床脊椎转移靶向治疗（如椎体成形术联合药物）提供实验依据）
- 生长特性：贴壁生长（核心缺陷为贴壁性差且生长极慢，复苏 / 传代后 48 小时才开始贴壁，50% 融合度需 2 周及以上，且伴随正常漂浮细胞团块与碎片；与 PC-3（贴壁稳定、25-50 小时倍增）、LNCaP（贴壁差但生长较快）相比，生长节奏显著更缓，需特殊培养耐心维护，适合开展长周期实验（如激素长期干预、骨基质重塑观察））
- 细胞形态：上皮细胞样（贴壁后呈小细胞团（紧密连接）与单细胞混合分布，细胞呈圆形或短梭形，胞质透亮，核仁清晰，具备激素敏感性前列腺癌细胞典型形态；因脊椎转移来源，部分细胞可能表达与脊椎骨基质黏附相关的表面结构（如整合素 α5β1），需通过免疫荧光验证；与 PC-3（排列规整多边形）、LNCaP（成簇生长）相比，小细胞团形态是关键鉴别点，可通过形态观察初步判断细胞生长状态，同时与 OS-RC-2 肾癌细胞形成器官特异性区分）
- 细胞代数：10 代以内（低代数细胞能更好保留 “激素敏感性、脊椎转移特性、慢生长” 核心特征，建议传代次数不超过 12 代，防止长期传代导致特性漂移，如激素敏感性减弱、贴壁能力异常增强、PSA 表达下降）
- 特别注意（贴壁与生长维护）：
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- 贴壁增强处理：因贴壁性差，必须使用 0.1% 明胶或 0.1mg/ml 多聚赖氨酸包被培养瓶（包被流程：取适量包被液铺满 T25 瓶底，37℃孵育 40 分钟，弃液后晾干 1 小时），或直接使用 Corning cellbind 培养瓶；包被后需 24 小时内接种细胞，避免基质失效；
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- 生长节奏管理：细胞生长极慢，50% 融合需 2 周以上，传代时需严格遵循推荐接种密度（T25 瓶建议接种 2×10⁵cells），避免密度过低延长生长周期；培养过程中出现漂浮细胞团块与碎片为正常现象，无需频繁换液（建议 3-4 天换液 1 次），换液时保留 1/4 旧培养基（含细胞分泌的生长因子）；
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- 漂浮细胞处理：传代或换液时，需收集漂浮细胞及碎片，1000rpm 离心 5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，与贴壁细胞合并培养，避免有效细胞流失；若漂浮细胞比例超过 30%，需检查培养箱温度（波动需＜±0.5℃）及培养基批次，排除环境因素影响。
- 背景介绍：VCaP 细胞于 1997 年从一位不受激素影响的前列腺癌患者脊椎转移灶中建立，先经小鼠异种移植传代再体外培养，核心特性及应用如下：①激素敏感性特色：体内外均对雄性激素敏感（区别于 PC-3 的去势抵抗），且表达 PSA、PAP 等前列腺特异性标志物，是研究激素敏感性骨转移（尤其是脊椎转移）的理想模型，可用于雄激素受体（AR）信号通路调控、激素联合骨靶向药物协同效应研究；②病毒风险提示：异种移植时可能依赖小鼠亲异逆转录病毒 Bxv-1，虽体外培养未检测到传染性病毒，但需注意生物安全防护（等级 2），避免高风险操作（如气溶胶产生）；③应用场景：广泛用于前列腺癌脊椎转移机制研究（如 AR 与骨基质蛋白交互作用）、激素敏感性骨转移药物筛选（如 AR 拮抗剂联合唑来膦酸）、转移部位特异性标志物挖掘，同时可与 PC-3（去势抵抗骨转移）搭配开展 “激素敏感 – 去势抵抗” 骨转移全病程研究。
- STR 位点信息：Amelogenin:X,Y（明确男性性别，与性别标注一致，可通过该位点验证细胞身份，排除交叉污染；与 PC-3 的 Amelogenin:X（矛盾）形成对比，无需额外性别验证，实验设计更便捷）; CSF1PO:10,12；D13S317:11,12；D16S539:9；D5S818:12；D7S820:9,12；THO1:9.3；TPOX:8,11；vWA:18,19（STR 位点含特异性杂合子（如 vWA:18,19），与 PC-3（多个纯合子）、LNCaP（多等位基因）的 STR 图谱差异显著，可通过图谱与保藏机构（ATCC CRL-2876）数据比对，确认细胞身份及脊椎转移特性）
- 生物安全等级：2（因存在小鼠亲异逆转录病毒 Bxv-1 潜在风险，生物安全等级高于 PC-3、LNCaP 的等级 1；操作需在生物安全二级实验室进行，穿戴防护服、护目镜，使用带滤芯吸头，实验废弃物需经 132℃高压灭菌 30 分钟，避免病毒扩散风险）
- 细胞规格：1×10⁶cells/T25 培养瓶或者 1mL 冻存管包装（冻存管含 10% DMSO 无血清冻存液，复苏后 48 小时贴壁存活率≥70%（低于 PC-3 的 85%），且激素敏感性、PSA 表达无显著改变；T25 瓶发货时已预包被明胶，附带 “慢生长” 提示标签，便于用户直接培养）
- 支原体检测：无（每批次细胞通过 PCR 法检测支原体（覆盖肺炎支原体、解脲支原体），结果为阴性，避免支原体污染进一步抑制细胞生长，保障长周期实验顺利开展）
- 保藏机构：ATCC; CRL-2876，ECACC; 06020201；中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（国际权威机构（ATCC、ECACC）与国内顶尖机构三重保藏，细胞来源可追溯，激素敏感性及脊椎转移特性经过严格验证，与 PC-3 的保藏体系互补，便于跨地域实验协作）
- 培养基：90% DMEM+10% FBS+PS（青霉素 – 链霉素）（核心特色：①采用高糖 DMEM 培养基，区别于 PC-3 的 F12K、LNCaP 的 RPMI-1640；高糖配方适配慢生长细胞的能量需求，维持细胞激素敏感性相关蛋白（如 AR）表达；②10% FBS 需选择 charcoal-stripped FBS（去除内源性激素），避免干扰雄激素敏感性实验；③PS 终浓度 100U/mL 青霉素、100μg/mL 链霉素，有效预防细菌污染，不影响病毒相关特性及细胞生长）
- 培养条件：气相：95% 空气 + 5% 二氧化碳；温度：37℃（培养箱湿度维持在 80%（高于常规细胞），减少培养基蒸发导致的渗透压升高，避免加重贴壁困难；培养箱需远离频繁开关区域，防止温度波动影响细胞贴壁与生长；与 PC-3、LNCaP 等前列腺癌细胞培养条件一致，仅需提升生物安全防护等级，便于多细胞株并行实验）
- 冻存条件：无血清冻存液，液氮储存（冻存操作适配慢生长与贴壁差特性：①选择 50% 融合度的细胞（培养 2 周左右），同时收集贴壁细胞（0.25% 胰酶 – EDTA 孵育 3-4 分钟）与漂浮细胞团，合并后轻柔吹散；②1000rpm 离心 5 分钟，用预冷冻存液重悬，调整浓度至 3×10⁶cells/mL（高于常规细胞），提升复苏后细胞密度；③冻存流程：4℃平衡 40 分钟→-20℃放置 3 小时（程序降温盒）→-80℃过夜→液氮保存；复苏时 37℃水浴 1.5 分钟融化，离心后用预热的 DMEM 重悬，接种至预包被培养瓶）
- 倍增时间：~53-144 hours（增殖速度极慢且范围宽，平均倍增时间是 PC-3 的 3-5 倍、LNCaP 的 2-4 倍，对数生长期为接种后 3-7 天；实验设计需延长药物处理时间（如 72-96 小时），设置多个时间节点（如 0、24、48、72 小时）监测细胞活性，避免因周期过短导致结果偏差）
- 致瘤性：Yes, in nude and SCID mice.（致瘤性覆盖免疫缺陷程度不同的小鼠：①裸鼠（T 细胞缺陷）与 SCID 小鼠（T/B 细胞双缺陷）均能成瘤，适合研究不同免疫缺陷状态下的骨转移模型构建；②建议脊椎原位接种（1×10⁶cells / 只），成瘤周期 4-6 周，通过 MRI 观察脊椎骨破坏及神经压迫情况，模拟临床脊椎转移病理特征，优于 PC-3 的皮下成瘤模型）
- 抗原表达情况：cytokeratin-18（上皮细胞标志物，验证细胞上皮属性）; p53 antigen（肿瘤抑制蛋白，提示细胞恶性特征）; prostate specific antigen (PSA)（前列腺特异性抗原，临床诊断标志物）; prostatic acid phosphatase (PAP)（前列腺酸性磷酸酶，与 LNCaP 高活性、PC-3 低活性形成对比）; Rb protein（视网膜母细胞瘤蛋白，细胞周期调控因子）（抗原表达覆盖身份验证、恶性特征、前列腺特异性标志物，可通过免疫组化或 Western Blot 检测，验证细胞表型稳定性，同时为临床转化研究（如 PSA 靶向治疗）提供靶点）
- 基因表达情况：与抗原表达一致（cytokeratin-18、p53、PSA、PAP、Rb protein）（可通过 RT-PCR 检测基因表达水平，分析激素处理（如睾酮）对 PSA、PAP 基因的调控作用，探索激素敏感性分子机制；与 PC-3（PSA/PAP 低表达）对比，验证基因表达的转移部位与激素表型特异性）
- 细胞货期：现货，1 周左右（库存细胞均经过激素敏感性验证（睾酮处理后 PSA 表达升高）及慢生长特性检测，确保核心特征稳定；下单后需提前 2 天准备包被培养瓶，48 小时内安排发货，可与 PC-3 同步下单，保障 “激素敏感 – 去势抵抗” 骨转移实验同步启动）
- 运输方式：复苏发货（T25 瓶免运输费用，采用防震恒温泡沫箱，内置 2-8℃冰袋及温度监测卡，运输过程中避免任何颠簸，减少贴壁细胞脱落；到达后立即放入生物安全二级实验室的培养箱，48 小时内不移动、不换液）/ 冻存发货（需加干冰运输费用，干冰用量按运输时长计算，确保到达时干冰剩余量≥60%，维持细胞冻存状态，附带病毒风险警示说明） 顺丰快递（优先选择次晨达服务，缩短运输时间，降低细胞活性损失及激素敏感性改变风险）
- 供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用（严禁用于临床治疗、细胞治疗等非科研用途；因含病毒潜在风险，需遵守《基因工程安全管理办法》，实验操作及废弃物处理严格符合生物安全二级实验室要求，定期开展病毒相关检测（如 Bxv-1 PCR））
- 特别说明：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主；该细胞实验操作需重点关注：①激素实验设计：开展雄激素敏感性实验时，设置 0、1、10、100nM 睾酮梯度，处理 72 小时后检测 PSA 表达（ELISA 法），设置 PC-3（阴性对照）、LNCaP（阳性对照），验证实验体系有效性；②脊椎转移模型构建：裸鼠脊椎原位接种时，需采用立体定位仪精准注射，接种后每周通过 MRI 监测肿瘤生长，6 周后取脊椎组织进行 HE 染色，观察骨破坏程度；③与 PC-3 的对比实验：搭配 PC-3 开展 “激素敏感 – 去势抵抗” 研究时，可：a. 检测 AR 及其剪接体（AR-V7）在两株细胞中的表达差异，分析激素抵抗机制；b. 对比 AR 拮抗剂（如恩扎卢胺）对两株细胞的 IC50 值，验证药物对激素敏感细胞的特异性效果；c. 检测骨转移相关基因（如 CXCR4、OPG）表达，分析转移部位特异性分子特征；④病毒风险防控：实验操作全程在生物安全柜内进行，避免产生气溶胶；定期用 PCR 检测细胞及培养基中的 Bxv-1 病毒，若检测阳性需立即终止实验并处理细胞；⑤长期培养监测：每 4 代检测 PSA 表达、激素敏感性及生长速度，若发现 PSA 表达下降、对睾酮无响应，需立即更换低代数种子细胞，确保实验结果可靠。
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